[发明专利]外源基因定点整合至ACTB基因下游的打靶载体构建方法及其应用

摘要

本发明公开了一种将外源基因定点整合至ACTB（beta‑actin）基因下游的打靶载体，所述的打靶载体是以ACTB基因终止密码子上下游的部分序列为左、右同源臂，将左同源臂、2A剪切肽序列、外源基因序列和右同源臂依次连接起来并构建到真核表达载体或克隆载体骨架上。将该打靶载体与含特异性靶向猪ACTB基因下游的CRISPR/Cas9切割载体共转染至猪真核细胞中，实验及测序检测证实该外源基因定点整合至ACTB基因下游。本发明提供的这一打靶位点，可以拓宽外源基因在猪基因组中整合位点的范围，为制备外源基因高效稳定表达的转基因猪奠定基础。

主权项

1.一种将外源基因定点整合至猪ACTB基因下游的打靶载体，其特征在于，以猪ACTB基因终止密码子上下游序列作为左、右同源臂，将左同源臂、2A剪切肽序列、外源基因序列和右同源臂依次连接起来并构建到真核表达载体或克隆载体骨架上，所述的左同源臂的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，右同源臂的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，2A序列如SEQ ID NO.3所示。