[发明专利]一种通过酵母发酵获得十三肽的方法及其应用

摘要

本发明提供了一种通过酵母发酵获得十三肽的方法及其应用，包括以下步骤：步骤1：配制培养基，1)一级种子培养基用YPD培养基，2)发酵表达培养基用BSM培养基。步骤2：将带有十三肽表达载体的毕赤酵母菌种发酵表达，得到的发酵液与甘草、苦参、金银花、蒲公英和马齿苋的提取物混合制备成凝胶制剂，本发明得到的发酵液成分简单，发酵过程容易操作，发酵步骤容易控制，成本低廉，有利于十三肽的大规模生产应用，获得的含有十三肽的发酵液有较强抑菌活性，有很大应用价值。可以中草药提取成分一起制成凝胶制剂，该凝胶制剂可涂覆于面部，具有消炎的功效。

主权项

1.一种通过酵母发酵获得十三肽的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1：配制培养基1)一级种子培养基用YPD培养基YPD培养基：将10g酵母提取物，20g蛋白胨，20g葡萄糖，溶于1000mL去离子水中，115℃高压灭菌，备用；2)发酵表达培养基用BSM培养基BSM培养基:在1L去离子水中按以下顺序依次分别溶解下列物质：26.7ml85％磷酸85％，18.2g硫酸钾，14.9g七水硫酸镁，0.93g二水硫酸钙，4.13g氢氧化钾；使用25％的氨水调节pH至5.5，添加0.5％的蛋白胨；步骤2：发酵表达1)取已鉴定活性的阳性菌落，接种于已经灭菌的200mL YPD培养基的挡板瓶中，在29℃，200rpm的条件下振荡培养24小时，使其在600nm波长处的吸光值达到4‑6；2)在种子菌发酵罐中加入YPD培养基和适量消泡剂，在115℃下，灭菌30min；3)使用火焰接种法将挡板瓶中的种子液接入到种子菌发酵罐中，调整发酵参数，发酵12h；4)在诱导表达发酵罐中加入改良BSM培养基和适量消泡剂，121℃，20min灭菌；5)转接管路高压蒸汽灭菌15min后，将种子发酵罐中的种子液按照1:30的量转入诱导表达发酵罐中，调整发酵参数，开始发酵；6)发酵6h后开始流加甲醇，发酵,72h后得到发酵产物。