[发明专利]一种利用二磷酸尿嘧啶脱氧核苷酸检测核酸中腺嘌呤N6位发生甲基化修饰的方法

摘要

本发明公开了一种利用二磷酸尿嘧啶脱氧核苷酸检测核酸中腺嘌呤N6位发生甲基化修饰的方法。该检测方法主要由两部分组成。第一部分是对被测核酸或对照核酸通过延伸反应将二磷酸尿嘧啶脱氧核苷酸（dUDP）掺入基因组序列。第二部分是使用变性聚丙烯酰胺凝胶分析延伸反应结果，经数据处理后得到被测核酸或对照核酸的延伸百分比，进行比较从而实现识别检测N⁶‑甲基腺嘌呤和N¹‑甲基腺嘌呤。该方法克服了现有检测方法设备需求高、操作繁琐等不足，灵敏度高、适应范围广，所用原料简单易得，操作简便。

主权项

1.一种利用二磷酸尿嘧啶脱氧核苷酸识别带有N⁶‑甲基腺嘌呤的核酸的方法，其特征在于，具体包括：(1)以二磷酸尿嘧啶脱氧核苷酸(dUDP)作为DNA合成的原料，在紧邻疑为N⁶‑甲基腺嘌呤的位点上游根据模板链序列设计一条长度为17‑20bp的引物，在DNA聚合酶或逆转录酶作用下与核酸共孵育进行延伸反应，以将二磷酸尿嘧啶脱氧核苷酸(dUDP)掺入序列，所述核酸为疑为含N⁶‑甲基腺嘌呤的位点的待测核酸或对照核酸，所述对照核酸为对应位点不含N⁶‑甲基腺嘌呤、序列与待测核酸相近且其他位点含N⁶‑甲基腺嘌呤水平与待测核酸相同的核酸；(2)步骤(1)的延伸产物通过变性聚丙烯酰胺凝胶分析，经凝胶成像仪测定被延伸的底物浓度和未被延伸的底物浓度，得到延伸百分比，所述延伸百分比为：延伸百分比＝被延伸的底物浓度/(被延伸的底物浓度+未被延伸的底物浓度)；(3)结果判定：如果待测核酸的延伸百分比小于对照核酸的延伸百分比，即可识别带有N⁶‑甲基腺嘌呤的核酸。