[发明专利]应用荧光实时定量PCR筛选重组汉逊酵母病毒样颗粒表达株的方法在审
| 申请号： | 201910303764.0 | 申请日： | 2019-04-16 |
| 公开（公告）号： | CN110093404A | 公开（公告）日： | 2019-08-06 |
| 发明（设计）人： | 张建城;杨晓宇;于佳平 | 申请（专利权）人： | 艾美汉信疫苗（大连）有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6851 | 分类号： | C12Q1/6851;C12Q1/04;C12R1/78 |
| 代理公司： | 大连非凡专利事务所 21220 | 代理人： | 闪红霞 |
| 地址： | 116600 辽宁*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： |
本发明公开一种应用荧光实时定量PCR筛选重组汉逊酵母病毒样颗粒表达株的方法：将重组汉逊酵母阳性克隆株接种至液体培养基中，培养至对数期进行诱导表达，对培养物进行采样并提取样品总RNA；使用一步法荧光实时定量PCR对所提取的总RNA进行反转录和特异性扩增，特异性扩增是扩增汉逊酵母肌动蛋白结构基因及构成病毒样颗粒的多个组件蛋白基因；获得各样品汉逊酵母肌动蛋白结构基因及病毒样颗粒的多个组件蛋白基因的扩增循环数，分别记为 |
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| 搜索关键词： | 病毒样颗粒 汉逊酵母 实时定量PCR 蛋白基因 特异性扩增 肌动蛋白 结构基因 应用荧光 总RNA 筛选 阳性克隆株 液体培养基 扩增循环 诱导表达 对数期 反转录 培养物 一步法 采样 扩增 荧光 接种 | ||
【主权项】：
1.一种应用荧光实时定量PCR筛选重组汉逊酵母病毒样颗粒表达株的方法，其特征在于按照如下步骤进行：a. 将构建完成的重组汉逊酵母阳性克隆株接种至液体培养基中，培养至对数期加入甲醇进行诱导表达24h，对培养物进行采样并提取样品总RNA；b. 使用一步法荧光实时定量PCR对所提取的样品总RNA进行反转录和特异性扩增，所述特异性扩增是扩增汉逊酵母肌动蛋白结构基因及构成病毒样颗粒的N个组件蛋白基因；c. 获得各样品汉逊酵母肌动蛋白结构基因及病毒样颗粒的N个组件蛋白基因的扩增循环数，分别记为![]()
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，所述n为1，2，3……N；d. 按下式计算![]()
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差值比例，![]()
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差值较大且比例与N个组件蛋白基因构成病毒样颗粒的比例相近的样品，即筛选出重组汉逊酵母病毒样颗粒表达株。
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