[发明专利]一种同步检测TMV、CMV和PVY的三重实时荧光定量RT-qPCR方法

摘要

本发明公开了一种同步检测TMV、CMV和PVY的三重实时荧光定量RT‑qPCR方法。本发明以TMV、CMV和PVY的外壳蛋白保守序列为靶标序列设计得到一组三重实时荧光定量RT‑qPCR引物组合，包括引物组qTMV‑F/qTMV‑R、引物组qCMV‑F/qCMV‑R、以及引物组qPVY‑F/qPVY‑R；其核苷酸序列依次如SEQ ID NO.1～6所示。并进一步以该引物组为基础，首次建立了三重实时荧光定量RT‑qPCR方法，能够快速、准确、高效地鉴定和检测TMV、CMV和PVY，检测灵敏度显著高于ELISA和RT‑PCR这两种方法。另外，该方法操作简单、检测灵敏度高、特异性强、稳定性好，易于基层检测单位推广使用，具有广阔的发展空间和良好的实际应用价值。

主权项

1.一种同步检测TMV、CMV和PVY的三重实时荧光定量RT‑qPCR引物组合，其特征在于，包括引物组qTMV‑F/qTMV‑R、引物组qCMV‑F/qCMV‑R、以及引物组qPVY‑F/qPVY‑R；其核苷酸序列依次如SEQ ID NO.1～6所示：引物qTMV‑F(如SEQ ID NO.1所示)：5’‑GATTTCCTGGCGATGTTT‑3’，引物qTMV‑R(如SEQ ID NO.2所示)：5’‑GTCGGACTCTGCTGGTTT‑3’，引物qCMV‑F(如SEQ ID NO.3所示)：5’‑TTCGTGGGTAGTGAAAGC‑3’，引物qCMV‑R(如SEQ ID NO.4所示)：5’‑GTCCGTGACTGAATCTGG‑3’，引物qPVY‑F(如SEQ ID NO.5所示)：5’‑GAAACTGAAATGCC AACT‑3’，引物qPVY‑R(如SEQ ID NO.6所示)：5’‑CATCATAACCCAAACTCC‑3’。