[发明专利]胃癌靶向P42.3基因的siRNAs表达载体及其在制备治疗胃癌的基因药物中的应用

摘要

本发明公开了胃癌靶向P42.3基因的siRNAs表达载体及其在制备治疗胃癌的基因药物中的应用，以psiRNA‑hH1neo为载体，在高表达P42.3的胃癌细胞系BGC823中发挥干扰作用，三段P42.3特异性RNA干涉靶序列分别为：①5′‑CTCCCAGTTTACAGCTTGA‑3′，起始于3170位；②5′‑CTGTGATGACACCCGGAAA‑3′，起始于3406位；③5′‑AGGGCACTTTGGTACACTGTC‑3′，起始于2545位。本发明靶向P42.3基因的siRNAs表达载体可特异性地抑制P42.3基因在胃癌细胞系BGC823中的表达，可用于制备治疗胃癌的基因药物。

主权项

1.胃癌靶向P42.3基因的siRNAs表达载体，其特征在于，以psiRNA‑hH1neo为载体，在高表达P42.3的胃癌细胞系BGC823中发挥干扰作用，制备方法包括以下步骤：(1)p42.3基因siRNAs靶位点的选择及siRNAs表达载体的靶序列设计与合成：三段P42.3特异性RNA干涉靶序列分别为：①5′‑CTCCCAGTTTACAGCTTGA‑3′，起始于3170位，19bp；②5′‑CTGTGATGACACCCGGAAA‑3′，起始于3406位，19bp；③5′‑AGGGCACTTTGGTACACTGTC‑3′，起始于2545位，21bp，分别设计并体外合成两端互补的寡核苷酸序列，序列如下：①寡核苷酸序列1正义链：5′‑TCCCACTCCCAGTTTACAGCTTGATCAAGAGTCAAGCTGTAAACTGGGAGTTT‑3′；反义链：5′‑CAAAAAACTCCCAGTTTACAGCTTGACTCTTGATCAAGCTGTAAACTGGGAGT‑3′；②寡核苷酸序列2正义链：5′‑TCCCACTGTGATGACACCCGGAAATCAAGAGTTTCCGGGTGTCATCACAGTTT‑3′；反义链：5′‑CAAAAAACTGTGATGACACCCGGAAACTCTTGATTTCCGGGTGTCATCACAGT‑3′；③寡核苷酸序列3正义链：5′‑TCCCAGGGCACTTTGGTACACTGTCTCAAGAGGACAGTGTACCAAAGTGCCCTTT‑3′；反义链：5′‑CAAAAAAGGGCACTTTGGTACACTGTCCTCTTGAGACAGTGTACCAAAGTGCCCT‑3′；(2)对psiRNA‑hH1neo载体进行线性化回收；(3)合成的寡核苷酸分别与步骤(2)获得的线性载体连接、转化，然后提取重组质粒并鉴定。