[发明专利]胃癌靶向P42.3基因的siRNAs表达载体及其在制备治疗胃癌的基因药物中的应用

说明书

本发明公开了胃癌靶向P42.3基因的siRNAs表达载体及其在制备治疗胃癌的基因药物中的应用，以psiRNA‑hH1neo为载体，在高表达P42.3的胃癌细胞系BGC823中发挥干扰作用，三段P42.3特异性RNA干涉靶序列分别为：①5′‑CTCCCAGTTTACAGCTTGA‑3′，起始于3170位；②5′‑CTGTGATGACACCCGGAAA‑3′，起始于3406位；③5′‑AGGGCACTTTGGTACACTGTC‑3′，起始于2545位。本发明靶向P42.3基因的siRNAs表达载体可特异性地抑制P42.3基因在胃癌细胞系BGC823中的表达，可用于制备治疗胃癌的基因药物。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及胃癌靶向P42.3基因的siRNAs表达载体及其在制备治疗胃癌的基因药物中的应用。

背景技术

胃癌是世界范围内常见的高发肿瘤，大多数是由于多种基因的异常表达引起的，细胞周期调控异常是肿瘤细胞最根本的特征之一。从组织中分离的细胞系广泛用于肿瘤的基础研究，目前以细胞系BGC823最为普遍，它是从一例低分化的原发胃胰癌组织中取材并进行体外培养而建立的，具有生长稳定，繁殖旺盛，分裂指数高，致癌性强，细胞间联接装置少等特点，同时细胞表面具有HLA抗原性，便于体外培养。研究表明，p42.3蛋白在胃肿瘤细胞的恶性增殖中发挥着重要的作用，P42.3基因是从胃癌BGC823系细胞系中筛选出的一种新基因，是细胞有丝分裂依赖性表达蛋白，DNA长约3877bp，表达由394个氨基酸组成的蛋白质，在人类胚胎期高表达，而在成年组织中低表达。P42.3基因在胃癌组织中高表达，但在正常胃黏膜中不表达或低表达，可促进肿瘤细胞的增殖和病灶转移。P42.3基因在胃癌的发生发展中有重要作用，但目前对于此基因的研究较少。因此构建靶向P42.3基因的siRNAs表达载体可以有效的抑制BGC823细胞生长，在胃癌的诊断治疗中具有重要的理论意义和应用价值。

发明内容

本发明的目的在于构建胃癌靶向P42.3基因的siRNAs表达载体，使p42.3基因沉默，表达量大幅度衰减，干扰后的BGC823细胞发生明显的形态学改变，生长明显受到抑制，克隆形成能力以及致瘤性均显著降低，对于开发新的治疗胃癌的基因药物具有重要指导作用。

本发明采用的技术方案如下：

胃癌靶向P42.3基因的siRNAs表达载体，以psiRNA-hH1neo为载体，在高表达P42.3的胃癌细胞系BGC823中发挥干扰作用，制备方法包括以下步骤：

(1)p42.3基因siRNAs靶位点的选择及siRNAs表达载体的靶序列设计与合成：

三段P42.3特异性RNA干涉靶序列分别为：①5′-CTCCCAGTTTACAGCTTGA-3′，起始于3170位，19bp；②5′-CTGTGATGACACCCGGAAA-3′，起始于3406位，19bp；③5′-AGGGCACTTTGGTACACTGTC-3′，起始于2545位，21bp，分别设计并体外合成两端互补的寡核苷酸序列，序列如下：

①寡核苷酸序列1

正义链：5′-TCCCACTCCCAGTTTACAGCTTGATCAAGAGTCAAGCTGTAAACTGGGAGTTT-3′；

反义链：5′-CAAAAAACTCCCAGTTTACAGCTTGACTCTTGATCAAGCTGTAAACTGGGAGT-3′；

②寡核苷酸序列2

正义链：5′-TCCCACTGTGATGACACCCGGAAATCAAGAGTTTCCGGGTGTCATCACAGTTT-3′；

反义链：5′-CAAAAAACTGTGATGACACCCGGAAACTCTTGATTTCCGGGTGTCATCACAGT-3′；

③寡核苷酸序列3