[发明专利]ATP生物荧光lgCA-lgIA标准曲线法评价日化品真菌杀灭效果的方法

摘要

本发明涉及一种日化品真菌杀灭效果的评价方法，检测步骤包括：样品提取及前处理要求；设备选型及试剂、培养基配制；菌种保藏、活化及菌悬液制备；美蓝染色后菌悬液活菌含量C_B血球板计数；ATP浓度对数值lgC_A‑相对荧光强度对数值lgI_A标曲建立及接种菌液活菌C_A标定；中和剂鉴定及杀菌试验；回收液I_A测定及其C_A和T_A推算；杀菌率R和灭菌指数A计算；结果评价；其特别之处在于：应用ATP荧光光度计对以R或A表征的日化品真菌杀灭效果进行精准定量测试。本发明规定回收染菌特定时间后的对照样品和试验样品，测定其I_A并以lgI_A表征和计算R或A；提供结果评价依据。本发明研发的日化品真菌杀灭效果评价的ATP生物荧光lgC_A‑lgI_A标曲法，将以先进的检测技术支撑产品质量提升。

主权项

1.一种日化品真菌杀灭效果的评价方法，包括：(1)样品提取及前处理要求；(2)设备选型及试剂、培养基配制；(3)菌种保藏、活化及菌悬液制备；(4)美蓝染色后菌悬液活菌含量C_B的血球板计数；(5)ATP浓度对数值lgC_A‑相对荧光强度对数值lgI_A标准曲线建立及接种菌液的活菌ATP浓度C_A标定；(6)中和剂鉴定及杀菌试验；(7)回收液相对荧光强度值I_A测定；(8)回收活菌的ATP浓度C_A和T_A推算及杀菌率R和灭菌指数A计算；(9)结果评价；其特征在于，应用ATP荧光光度计对以杀菌率R或灭菌指数A表征的日化品真菌杀灭效果进行精准定量测试的ATP生物荧光lgC_A‑lgI_A标准曲线法，具体的：在回收液相对荧光强度值I_A测定中：明确对照样品和试验样品的提取及前处理等要求，将真菌试验菌种的标准菌株进行传代、活化后，取新鲜的白色念珠菌或霉菌孢子培养物制备菌悬液；经美蓝染色后用血球计数板测定菌液的活菌含量C_B，并对不同稀释度的菌悬液进行C_B标定，然后，用ATP荧光试剂缓冲溶液将1.0×10^‑3mol/L的ATP标准原液梯度稀释为高、低浓度标准系列溶液：7.0×10^‑7mol/L、7.0×10^‑6mol/L、7.0×10^‑5mol/L(如果仪器检测上限无法达到10^‑5mol/L量级或高浓度标准曲线的线性较差，可将其ATP浓度系列改为7.0×10^‑8mol/L、7.0×10^‑7mol/L、7.0×10^‑6mol/L)和1.4×10^‑9mol/L、1.4×10^‑8mol/L、1.4×10^‑7mol/L，测定其相对荧光强度值I_A；绘制两条相应浓度的lgC_A‑lgI_A标准曲线，推导得出曲线方程式Y＝a_A0X+b_A0(高浓度)、Y＝a_AX+b_A(低浓度)和线性相关系数R_A0²(高浓度)、R_A²(低浓度)，用察氏培养液对活菌含量C_B为1.0×10⁸CFU/mL～5.0×10⁸CFU/mL的试验菌种悬浮液进行10倍梯度稀释，测定稀释菌液的相对荧光强度值I_A，根据高浓度标准曲线方程式Y＝a_A0X+b_A0推算其相应的活菌ATP浓度C_A；经调整得到C_A为5.0×10^‑6mol/L～9.0×10^‑6mol/L的接种菌液，在中和剂鉴定结果合格的条件下，向4.7mL各组对照样品和试验样品中分别加入0.2mL菌液并混匀；待杀菌作用持续至规定时间后，用4.41mL中和剂溶液对0.49mL染菌样液进行中和回收，应用ATP荧光光度计测定回收液的相对荧光强度值I_ACij和I_ATij，根据低浓度标准曲线方程式Y＝a_AX+b_A推算相应的活菌ATP浓度C_Aij和T_Aij；根据ATP低浓度标准曲线lgC_A‑lgI_A的线性方程式Y＝a_AX+b_A，以特定染/杀菌时间内每件对照样品和试验样品回收液的相对荧光强度测定值和作为基础数据；计算每件日化样品的真菌杀菌率R_ij及灭菌指数A_ij，并以每组样品R_ij和A_ij的算术平均值为其杀菌率R_i和灭菌指数A_i；对三组样品的R_i或A_i取算术平均值，得到每批日化样品的真菌杀菌率R或灭菌指数A；同时明确相关数据修约和测量不确定度要求；在结果评价中：参考卫生行业通用做法和相关抗菌产品标准要求，确定日化品真菌杀灭效果分级判定标准；当某组(件)日化样品的杀菌率R_i(R_ij)或灭菌指数A_i(A_ij)与其他两组(件)样品的真菌杀灭效果相比至少相差一个水平级时，重新提取一组样品重复实验；计算其经ATP生物荧光lgC_A─lgI_A标准曲线法测得的杀菌率或灭菌指数，如果前后两组(件)日化样品的真菌杀灭效果水平相同，则弃之；取另外两组(件)剩余样品杀菌率R_i(R_ij)或灭菌指数A_i(A_ij)的算术平均值作为该批次(组)日化样品真菌杀灭效果的评价结果。