[发明专利]耐重金属微生物的土壤定殖能力的检测方法

摘要

本发明提供一种耐重金属微生物的土壤定殖能力的检测方法，通过将微生物在梯度浓度的重金属离子的液体培养基和平板上进行交替培养、逐级诱导方式类推出微生物对重金属的最终耐受浓度，再在耐受浓度中进行交替培养，确保菌株耐受的稳定性，得到标记菌株；以原始菌株为对照，比对标记菌株，采用梯度稀释法检测土壤待测样品中的菌落数，通过比较二者菌落数来判断耐重金属微生物在土壤中的定殖情况。本发明由于土壤中土著微生物未经驯化培养不能耐受较高浓度重金属，因此可快速且有效检测出重金属耐受性标记菌株，并分析其定殖能力，为菌株的进一步深化研究提供参考；对农业领域生物肥料、生物农药等筛选耐受重金属的微生物菌剂具有重要的指导意义。

主权项

1.一种耐重金属微生物的土壤定殖能力的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：1)确定最终耐受浓度：配制梯度浓度的含重金属离子的液体培养基和制备对应浓度梯度的含重金属离子的平板，将微生物接种在初始浓度的含重金属离子的液体培养基培养，完成后，涂布于含有相同浓度的重金属离子的平板上培养，挑取生长最快的单菌落进入下一浓度梯度诱导，以此类推出微生物的最终耐受浓度和耐重金属微生物菌株；2)稳定性筛选：将步骤1)所得耐重金属微生物菌株在所确定的最终耐受浓度的含重金属离子的液体培养基中传代培养3～5代后；先在最终耐受浓度的含重金属离子的液体培养基和含有相同浓度的重金属离子的平板上交替培养，再在不含重金属离子的液体培养基和平板上交替培养，培养3～5代；培养完成的耐重金属微生物菌株接种至最终耐受浓度含重金属离子的液体培养基进行筛选，得出重金属耐受稳定的标记菌株；3)检测：以原始菌株为对照，比对步骤2)得出的标记菌株，采用梯度稀释法将土壤待测样品涂布于含重金属离子的平板进行培养，完成后计数原始菌株与标记菌株菌落数，判断所述耐重金属微生物在土壤中的定殖能力。