[发明专利]一种检测KRAS基因外显子2密码子12/13突变的试剂盒及其制备方法在审
| 申请号： | 201910065629.7 | 申请日： | 2019-01-24 |
| 公开（公告）号： | CN109593856A | 公开（公告）日： | 2019-04-09 |
| 发明（设计）人： | 宋现让;宋兴国;谢丽 | 申请（专利权）人： | 宋现让 |
| 主分类号： | C12Q1/6886 | 分类号： | C12Q1/6886;C12Q1/686;C12N15/11 |
| 代理公司： | 济南泉城专利商标事务所 37218 | 代理人： | 李桂存 |
| 地址： | 250117 山东省济南市*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明涉及生物医学核酸检测试剂盒技术领域，具体为检测KRAS基因外显子2密码子12/13突变的方法及试剂盒的研发。试剂盒包括：PCR扩增引物，Taq‑man探针，数字PCR预混液、微滴生成油、阴性对照和阳性对照；该试剂盒价格低廉，操作简单，可重复获取，基于微滴式数字PCR技术平台，由于其仅须一次PCR反应即可同时检测KRAS最常见的密码子12和13位点的多种缺失类型，可明显减少试剂、耗材的消耗，单次检测的成本仅为其他微滴式数字PCR的1/8。以前技术方法的灵敏度一般在1％‑50％之间，而我们提出的技术方法对基因变异的检测灵敏度提升非常明显，为1/1000。同时提供该试剂盒的检测方法，为个体化用药提供参考。 | ||
| 搜索关键词： | 试剂盒 数字PCR 密码子 微滴 外显子 检测 突变 核酸检测试剂盒 个体化用药 检测灵敏度 单次检测 基因变异 技术平台 减少试剂 缺失类型 生物医学 阳性对照 阴性对照 一次PCR 灵敏度 可重复 生成油 预混液 种检测 耗材 位点 研发 制备 消耗 参考 | ||
【主权项】：
1.一种检测KRAS外显子2密码子12/13突变的试剂盒，其特征在于，包括： PCR 扩增引物， Taq‑man探针，数字PCR预混液、微滴生成油、阴性对照和阳性对照；所述的PCR 扩增引物，包括反向PCR 扩增引物和正向PCR 扩增引物，可扩增含有KRAS 外显子2上c.5522‑c.5637 (116‑bp amplicon)序列如SEQ No.1所示；所述的PCR扩增引物序列如下：上游引物序列如SEQ No.2所示；下游引物序列如SEQ No.3所示；参考探针序列如SEQ No.4所示；位点探针序列如SEQ No.5所示。
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