[发明专利]一种人卵母细胞的体外成熟培养液制备方法和培养方法

摘要

本发明公开一种人卵母细胞的体外成熟培养液制备方法和培养方法，包含以下操作步骤：血清制作：将血液放入至离心机内进行离心操作，并取出血清部分备用，抗生素液制作：分别将100ug/ml青霉素、100ug/ml链霉素、50ug/ml卡那霉素和25ug/ml制菌霉素以1：2：1：3的比例充分混合，以此制得抗生素液备用。该人卵母细胞的体外成熟培养液制备方法和培养方法，使用多种盐溶液和抗生素作为辅助生长剂，使用较为普遍的牛犊血清作为基础，同时采用添加NaHCO3和HEPES溶液的方式调节培养液的PH值，给卵母细胞提供生存条件的同时抑制了杂菌的生长，避免了由于杂菌感染而导致的研究困难，同时提高了卵母细胞的体外成熟率，降低了制造成本，降低研究难度的同时方便了使用者的使用。

主权项

1.一种人卵母细胞的体外成熟培养液制备方法，其特征在于：包含以下操作步骤：S1、血清制作：将血液放入至离心机内进行离心操作，并取出血清部分备用；S2、抗生素液制作：分别将100ug/ml青霉素、100ug/ml链霉素、50ug/ml卡那霉素和25ug/ml制菌霉素以1：2：1：3的比例充分混合，以此制得抗生素液备用；S3、离子液制作：分别将75IU/L rFSH、150IU/L rHCG、20% SPS、2mg/L EGF和25mmol/L丙酮酸钠以1：3：2：2的比例充分混合，以此制得离子液备用；S4、溶液混合：将步骤S1得到的血清、步骤S2得到的抗生素液和步骤S3得到的离子液以5：1：2的比例混合，并充分搅拌，以此得到营养液；S5、PH值调试：检测步骤S4中得到的营养液的PH值，通过添加3.7%的NaHCO3和HEPES溶液进行PH值的调试，并使得混合液PH值在范围7.2‑7.4内（即若PH值小于7.2，则添加NaHCO3，若PH值大于7.4，则添加HEPES溶液，直至PH值在7.2‑7.4时为止），以此完成培养液的制作。