[发明专利]一种人卵母细胞的体外成熟培养液制备方法和培养方法

权利要求书

1.一种人卵母细胞的体外成熟培养液制备方法，其特征在于：包含以下操作步骤：

S1、血清制作：将血液放入至离心机内进行离心操作，并取出血清部分备用；

S2、抗生素液制作：分别将100ug/ml青霉素、100ug/ml链霉素、50ug/ml卡那霉素和25ug/ml制菌霉素以1：2：1：3的比例充分混合，以此制得抗生素液备用；

S3、离子液制作：分别将75IU/L rFSH、150IU/L rHCG、20% SPS、2mg/L EGF和25mmol/L丙酮酸钠以1：3：2：2的比例充分混合，以此制得离子液备用；

S4、溶液混合：将步骤S1得到的血清、步骤S2得到的抗生素液和步骤S3得到的离子液以5：1：2的比例混合，并充分搅拌，以此得到营养液；

S5、PH值调试：检测步骤S4中得到的营养液的PH值，通过添加3.7%的NaHCO3和HEPES溶液进行PH值的调试，并使得混合液PH值在范围7.2-7.4内（即若PH值小于7.2，则添加NaHCO3，若PH值大于7.4，则添加HEPES溶液，直至PH值在7.2-7.4时为止），以此完成培养液的制作。

2.根据权利要求1所述的一种人卵母细胞的体外成熟培养液制备方法，其特征在于：所述步骤S1中的血液为牛犊动脉血液。

3.根据权利要求1所述的一种人卵母细胞的体外成熟培养液制备方法，其特征在于：所述步骤S4中充分搅拌的用时为30-40分钟。

4.根据权利要求1所述的一种人卵母细胞的体外成熟培养液制备方法，其特征在于：所述步骤S5中添加的NaHCO3和HEPES溶液的总质量不得超过原营养液质量的3%。

5.一种人卵母细胞的培养方法，其特征在于：包含以下操作步骤：

S1、培养皿的准备：根据培养的规模选择容量适合的培养皿，并对所选的培养皿进行清洗和消毒操作；

S2、培养液添加：在无菌环境下，将培养液添加于培养皿中；

S3、细胞添加：将细胞溶液滴入至培养液上，且保证每滴细胞溶液在滴落后不相互接触随后盖上培养皿的盖子；

S4、细胞培养：将步骤S3中得到的培养皿放入至温度23-28℃的无菌环境下培养，并每周观察一次，并在观察时，将培养皿的盖子打开5-10分钟，以此进行培养操作。

6.根据权利要求5所述的一种人卵母细胞的培养方法，其特征在于：所述步骤S2中添加培养液的量的范围为所用培养皿容量的50%-70%。

7.根据权利要求5所述的一种人卵母细胞的培养方法，其特征在于：所述步骤S3中对环境的要求为：无菌，温度23-28℃，相对湿度40%-50%，空气内含氧量大于20%。