[发明专利]一种提高CHO细胞重组蛋白表达水平的方法及其应用，表达载体、表达系统及其制备方法有效
| 申请号： | 201910012271.1 | 申请日： | 2019-01-07 |
| 公开（公告）号： | CN109628489B | 公开（公告）日： | 2022-09-23 |
| 发明（设计）人： | 林重超;王天云;郭潇;赵春澎;倪天军;林艳;王燕芳 | 申请（专利权）人： | 新乡医学院 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/65;C12N15/67;C12N15/113 |
| 代理公司： | 郑州睿信知识产权代理有限公司 41119 | 代理人： | 牛爱周 |
| 地址： | 453003*** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种提高CHO细胞重组蛋白表达水平的方法及其应用，表达载体、表达系统及其制备方法，属于基因工程技术领域。本发明中的方法应用CHO细胞内源miRNAs与3′‑UTR转录区互补结合来对筛选标记基因表达进行负性调节，进而提高目的基因的表达量。将miRNAs与3′‑UTR转录区克隆到筛选标记基因的下游，构建真核表达载体；然后将目的基因克隆到真核表达载体获得重组表达载体，然后将其转染细胞，获得CHO细胞表达系统，实现目的基因的高效表达。本发明的CHO细胞表达系统，可以显著提高目的基因在CHO细胞中的表达水平，实现目的蛋白在CHO细胞的高产量稳定表达。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 提高 cho 细胞 重组 蛋白 表达 水平 方法 及其 应用 载体 系统 制备 | ||
【主权项】：
1.一种提高CHO细胞重组蛋白表达水平的方法，其特征在于：包括以下步骤：（1）将与CHO细胞内源miRNAs序列互补结合的mRNA靶基因的3′‑UTR转录区序列克隆到表达载体的筛选标记基因的下游，构建真核表达载体；（2）将目的基因克隆到真核表达载体上，构建重组表达载体；（3）将重组表达载体转染到CHO细胞中，培养并筛选，得到CHO细胞表达系统；（4）对CHO细胞表达系统进行诱导表达，得到目的蛋白。
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