[发明专利]筛选谷氨酰胺转氨酶高产菌株的方法在审
| 申请号： | 201910009809.3 | 申请日： | 2019-01-05 |
| 公开（公告）号： | CN109593821A | 公开（公告）日： | 2019-04-09 |
| 发明（设计）人： | 史百鸣;王运龙;卢雪峰;李国莹;陆瑞琪 | 申请（专利权）人： | 江苏一鸣生物股份有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/04 | 分类号： | C12Q1/04 |
| 代理公司： | 苏州国卓知识产权代理有限公司 32331 | 代理人： | 明志会 |
| 地址： | 225432 *** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种筛选谷氨酰胺转氨酶高产菌株的方法，包括以下步骤：步骤一，经诱变后的菌悬液稀释适当倍数后涂布于高氏一号固体培养基上培养四天，培养基表面有明显单菌落生成；步骤二，将培养基上的单菌落编号标记，用无菌牙签挑取少量菌落上的菌体对应转移至新培养基上培养，为验证后的高产菌株保存孢子；步骤三，使用灭菌后的醋酸纤维素膜覆盖于高氏一号培养基表面，轻轻挤压使单菌落上菌体粘附于膜表面，粘附菌体一面向上转移至发酵固体培养基上继续培养7‑10天，至形成较大的单菌落，表面有明显的白色孢子。本发明提高谷氨酰胺转氨酶高产菌株的筛选效率，缩短筛选周期，减少成本，提高实验结果准确性。 | ||
| 搜索关键词： | 高产菌株 单菌落 谷氨酰胺转氨酶 培养基 菌体 筛选 粘附 高氏一号培养基 牙签 醋酸纤维素膜 固体培养基 培养基表面 白色孢子 编号标记 发酵固体 高氏一号 菌悬液 膜表面 菌落 灭菌 孢子 无菌 稀释 诱变 挤压 验证 保存 覆盖 | ||
【主权项】：
1.一种筛选谷氨酰胺转氨酶高产菌株的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一，经诱变后的菌悬液稀释适当倍数后涂布于高氏一号固体培养基上培养四天，培养基表面有明显单菌落生成；步骤二，将培养基上的单菌落编号标记，用无菌牙签挑取少量菌落上的菌体对应转移至新培养基上培养，为验证后的高产菌株保存孢子；步骤三，使用灭菌后的醋酸纤维素膜覆盖于高氏一号培养基表面，轻轻挤压使单菌落上菌体粘附于膜表面，粘附菌体一面向上转移至发酵固体培养基上继续培养7‑10天，至形成较大的单菌落，表面有明显的白色孢子；步骤四，取下长有单菌落的醋酸纤维素膜置于滤纸上，均匀喷洒底物溶液后迅速将膜转移至37℃下反应十分钟，取出后继续均匀喷洒一定量的终止剂至菌落上形成明显的红色；步骤五，选取颜色较深的菌株，扩培对应的孢子后进行复筛；步骤六，保存孢子后传代验证其遗传稳定性，八代遗传后若酶活稳定即为筛选的目的菌株。
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