[发明专利]一种基于CRISPR/Cas9的蜜蜂基因编辑方法有效
| 申请号： | 201811635230.X | 申请日： | 2018-12-29 |
| 公开（公告）号： | CN109652459B | 公开（公告）日： | 2020-08-07 |
| 发明（设计）人： | 胡小芬;曾志将;王子龙;颜伟玉 | 申请（专利权）人： | 江西农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/90 | 分类号： | C12N15/90;C12N15/12;A01K67/027 |
| 代理公司： | 北京集智东方知识产权代理有限公司 11578 | 代理人： | 吴倩;龚建蓉 |
| 地址： | 330045 江西省南昌*** | 国省代码： | 江西;36 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种基于CRISPR/Cas9的蜜蜂基因编辑方法及基因编辑材料，其包括如下步骤：S1、确定靶基因的sgRNA序列；S2、合成靶基因的sgRNA；S3、在蜂卵的尾部背侧或近头端腹侧显微注射编辑材料，以及进行注射卵的后期孵化；S4、注射卵靶基因的PCR扩增；以及S5、对步骤S4中获得的PCR扩增产物进行测序，以获得靶基因的基因编辑结果。其将蜜蜂基因编辑中的注射位点由尾部改为靠近头端的腹侧；同时首次在蜜蜂中使用sgRNA+Cas9蛋白混合物为基因编辑材料，高效地获得了G0代双敲Indel突变体，大大简化了培育双敲突变体工蜂的繁育过程，降低了蜜蜂基因编辑研究的生态风险。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 基于 crispr cas9 蜜蜂 基因 编辑 方法 | ||
【主权项】：
1.一种基于CRISPR/Cas9的蜜蜂基因编辑方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、确定靶基因的sgRNA序列；S2、合成靶基因的sgRNA；S3、在蜂卵的近头端腹侧显微注射编辑材料，以及进行注射卵的后期孵化；S4、注射卵靶基因的PCR扩增；以及S5、对步骤S4中获得的PCR扩增产物进行测序，以获得靶基因的基因编辑结果。
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