[发明专利]一种厚壳贻贝眼点幼虫的电穿孔转染方法有效
| 申请号： | 201811562874.0 | 申请日： | 2018-12-20 |
| 公开（公告）号： | CN109456994B | 公开（公告）日： | 2021-05-11 |
| 发明（设计）人： | 李一峰;梁箫;程之扬;陈珂;竹攸汀;杨金龙 | 申请（专利权）人： | 上海海洋大学 |
| 主分类号： | C12N15/87 | 分类号： | C12N15/87;C12Q1/6851 |
| 代理公司： | 北京金智普华知识产权代理有限公司 11401 | 代理人： | 杨采良 |
| 地址： | 200000 上*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明属于水产生物基因工程领域，公开了一种厚壳贻贝眼点幼虫的电穿孔转染方法，根据克隆得到厚壳贻贝甲状腺素受体基因全长序列设计siRNA，采用不同参数设置分析不同脉冲模式对甲状腺素受体基因的敲减情况；收集电穿孔转染后96h的幼虫，提取幼虫RNA；设计甲状腺素受体基因引物，利用荧光定量PCR检测甲状腺素受体基因的表达情况。本发明与未加siRNA和无义siRNA处理后进行比较，结果显示加入甲状腺素受体基因siRNA显著降低了该基因的表达量，敲减效率近100％。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 贻贝 眼点 幼虫 穿孔 转染 方法 | ||
【主权项】：
1.一种厚壳贻贝眼点幼虫的电穿孔转染方法，其特征在于，所述厚壳贻贝眼点幼虫的电穿孔转染方法包括：眼点幼虫的筛选：将厚壳贻贝从担轮幼虫在培养箱中培养至眼点幼虫阶段；siRNA电穿孔转染:对所筛选的眼点幼虫经无菌过滤海水清洗；将厚壳贻贝眼点幼虫转移至含有无菌过滤海水和厚壳贻贝甲状腺素受体基因siRNA的电击杯中；进行方波脉冲处理；待眼点幼虫复苏后，转移至自然海水中培养，收集眼点幼虫样品用于RNA提取用于荧光定量PCR验证；荧光定量PCR验证：采用引物对基因进行厚壳贻贝甲状腺素受体基因及两个内参基因EF‑1α和αTubulin进行表达分析。
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