[发明专利]基于酿酒酵母CRISPR文库的工业酿酒酵母抗逆性改造

摘要

本发明设计并构建了适用于酿酒酵母的sgRNA文库(该sgRNA文库包含针对抗逆调控库中的一种或多种基因、细胞生长及代谢调控库中的一种或多种基因和/或分子及转录水平调控库中的一种或多种基因的sgRNA)，将该sgRNA文库应用于环境条件诱导的酿酒酵母适应性进化过程中，通过将CRISPR/Cas9系统的高效定向编辑与环境条件诱导的适应性进化联合，特别是借助酿酒酵母非同源末端连接(NHEJ)修复机制进行全基因组“改写”，大大推动了酿酒酵母的整体进化，获得了具备多重抗逆性(抵抗工业物料压力、温度压力和乙醇压力)的工业酿酒酵母。

主权项

1.一种用于提高酿酒酵母抗逆性的sgRNA文库，所述sgRNA文库包含针对抗逆调控库中的一种或多种基因、细胞生长及代谢调控库中的一种或多种基因和/或分子及转录水平调控库中的一种或多种基因的sgRNA，其中，所述抗逆调控库包含热激蛋白基因、泛素系统基因、蛋白酶体基因、抗高渗调节基因、pH响应调节基因、蛋白质平衡基因、蛋白质质量控制系统基因、分子伴侣基因、抗氧化防御系统基因、超氧化物歧化酶基因、自噬系统基因；所述细胞生长及代谢调控库包含翻译后调控基因、转录调控基因、抑制调控基因、衰老调控基因、同源保守区基因、糖酵解调控基因、线粒体生物合成调控基因、URS2负调控基因、细胞周期调控基因、核糖核酸酶系统基因、细胞膜调控基因、核糖核酸聚合酶调控基因；以及所述分子及转录水平调控库包含SR蛋白激酶基因、Gal系统基因、信号转导基因、金属硫蛋白多路调控基因、亮氨酸拉链式二聚体基因、钙调系统基因、氮调节基因、组蛋白调节基因、核内RNA前体下调基因、嘧啶通路调节基因、多肽逆行调控基因、血红素生物合成途径调控基因、磷酸丙酮酸水合酶(烯醇酶)调节基因、多肽氧调节基因。