[发明专利]基于CRISPR/Cas9系统高通量构建棉花突变体库的方法在审
| 申请号： | 201811393902.0 | 申请日： | 2018-11-21 |
| 公开（公告）号： | CN109517846A | 公开（公告）日： | 2019-03-26 |
| 发明（设计）人： | 郭小平;徐孝兰;张军 | 申请（专利权）人： | 华中农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/90 | 分类号： | C12N15/90;C12N15/82;C12N15/66;A01H5/00;A01H6/60 |
| 代理公司： | 武汉宇晨专利事务所 42001 | 代理人： | 张红兵 |
| 地址： | 430070 湖*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明属于植物基因工程技术领域，具体涉及基于CRISPR/Cas9系统高通量构建棉花突变体库的方法。本发明构建了一个陆地棉的转化载体，利用这个载体在陆地棉基因组中进行高通量编辑的应用。本发明通过带有接头的引物克隆得到tRNA和CcdB基因片段，将这些基因片段连接至适用于陆地棉基因组编辑的pRGEB32‑GhU6.7‑NPTⅡ转化载体中成为一种可以高通量编辑棉花基因组的载体Htkt。本发明利用高通量转化载体的特点，可大批量设计陆地棉靶标片段并进行混合构建载体最终得到棉花突变体库。高通量测序结果表明，这种高通量载体的sgRNA覆盖率高达97％。 | ||
| 搜索关键词： | 高通量 陆地棉 构建 突变体库 转化载体 基因组 棉花 植物基因工程技术 高通量测序 棉花基因组 靶标片段 基因片段 引物 克隆 覆盖率 应用 | ||
【主权项】：
1.一种基于CRISPR/Cas9系统高通量构建棉花突变体库的高通量载体Htkt，其核苷酸序列如序列表SEQ ID NO：5所示。
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