[发明专利]一种提高发酵罐制备酿酒酵母细胞表面展示α-半乳糖苷酶表达量的新方法有效
| 申请号： | 201811376623.3 | 申请日： | 2018-11-19 |
| 公开（公告）号： | CN109517815B | 公开（公告）日： | 2022-09-13 |
| 发明（设计）人： | 李苏红;董墨思;公云;李拖平 | 申请（专利权）人： | 沈阳农业大学 |
| 主分类号： | C12N9/40 | 分类号： | C12N9/40;C12N15/81;C12N1/19;C12R1/865 |
| 代理公司： | 沈阳杰克知识产权代理有限公司 21207 | 代理人： | 金春华 |
| 地址： | 110866 辽*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | 本发明公开一种提高发酵罐制备酿酒酵母细胞表面展示α‑半乳糖苷酶表达量的新方法。本发明通过向10L的发酵罐体系中酿酒酵母细胞表面展示α‑半乳糖苷酶的诱导培养基里加入限定浓度的硫酸铵0.05‑0.5％，并创新地以持续流加的方式补充诱导剂使其浓度维持在1‑3％，实现酿酒酵母的菌体生长量及酿酒酵母细胞表面展示α‑半乳糖苷酶表达量的大幅提高。采用本发明的方法，酿酒酵母细胞表面展示α‑半乳糖苷酶的单位酶活性及回收总酶活性是一般培养的3.7倍和7.9倍。为工业化制备生产酿酒酵母细胞表面展示α‑半乳糖苷酶提供了新途径。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 提高 发酵 制备 酿酒 酵母 细胞 表面 展示 半乳糖 表达 新方法 | ||
【主权项】：
1.一种提高发酵罐制备酿酒酵母细胞表面展示α‑半乳糖苷酶表达量的新方法，其特征在于，包括如下步骤：1)制备种子液：将酿酒酵母细胞表面展示α‑半乳糖苷酶基因工程菌株置于含葡萄糖的YNB‑CAA培养基中，培养至菌体OD600＝2.0～3.0时，回收菌体，得种子液；2)诱导表达：于10L发酵罐中，将种子液以2～5％的接种量，接种于含半乳糖和补充氮源的YNB‑CAA培养基中，搅拌转速为100rpm，以0.5L/min速度通入空气，20～30℃下，诱导表达30～40h，离心收集菌体。
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