[发明专利]一种提高发酵罐制备酿酒酵母细胞表面展示α-半乳糖苷酶表达量的新方法有效
| 申请号： | 201811376623.3 | 申请日： | 2018-11-19 |
| 公开（公告）号： | CN109517815B | 公开（公告）日： | 2022-09-13 |
| 发明（设计）人： | 李苏红;董墨思;公云;李拖平 | 申请（专利权）人： | 沈阳农业大学 |
| 主分类号： | C12N9/40 | 分类号： | C12N9/40;C12N15/81;C12N1/19;C12R1/865 |
| 代理公司： | 沈阳杰克知识产权代理有限公司 21207 | 代理人： | 金春华 |
| 地址： | 110866 辽*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 提高 发酵 制备 酿酒 酵母 细胞 表面 展示 半乳糖 表达 新方法 | ||
1.一种提高发酵罐制备酿酒酵母细胞表面展示α-半乳糖苷酶表达量的新方法，其特征在于，包括如下步骤：
1）制备种子液：将酿酒酵母细胞表面展示α-半乳糖苷酶基因工程菌株置于含葡萄糖的YNB-CAA培养基中，培养至菌体OD600=2.0～3.0时，回收菌体，得种子液；α-半乳糖苷酶基因来源于
2）诱导表达：于10L发酵罐中，将种子液以2～5 %的接种量，接种于含半乳糖和补充氮源的YNB-CAA培养基中，搅拌转速为100rpm，以0.5L/min速度通入空气，20～30℃下，诱导表达30～40 h，离心收集菌体；在诱导表达全过程中，以流加方式持续加入半乳糖，保持10L发酵罐中，培养基中半乳糖浓度为1～3 %；氮源为硫酸铵，其浓度范围为0.05%-0.5%。
2.根据权利要求1所述的一种提高发酵罐制备酿酒酵母细胞表面展示α-半乳糖苷酶表达量的新方法，其特征在于，所述的酿酒酵母细胞表面展示α-半乳糖苷酶基因工程菌株的制备方法如下：将α-半乳糖苷酶基因与载体pYD1连接后获得重组质粒，将重组质粒转化至酵母EBY100中，获得酿酒酵母细胞表面展示α-半乳糖苷酶基因工程菌株。
3.根据权利要求1所述的一种提高发酵罐制备酿酒酵母细胞表面展示α-半乳糖苷酶表达量的新方法，其特征在于，步骤1）中，所述的含葡萄糖的YNB-CAA培养基的组成为：0.67%YNB，0.5%酸水解酪蛋白，2%葡萄糖，余量水。
4.根据权利要求1所述的一种提高发酵罐制备酿酒酵母细胞表面展示α-半乳糖苷酶表达量的新方法，其特征在于，步骤2）中，所述的含半乳糖和补充氮源的YNB-CAA培养基的组成为：0.67%YNB，0.5%酸水解酪蛋白，2%半乳糖，0.05～0.5%补充氮源，余量水。
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