[发明专利]一种日本黄姑鱼鱼肉免疫调节肽的制备方法在审
| 申请号： | 201811304844.X | 申请日： | 2018-11-02 |
| 公开（公告）号： | CN109371083A | 公开（公告）日： | 2019-02-22 |
| 发明（设计）人： | 余方苗;胡旭阳;唐云平;黄芳芳;杨最素;丁国芳 | 申请（专利权）人： | 浙江海洋大学 |
| 主分类号： | C12P21/06 | 分类号： | C12P21/06;C12Q1/02 |
| 代理公司： | 杭州杭诚专利事务所有限公司 33109 | 代理人： | 尉伟敏 |
| 地址： | 316100 浙江省舟山市普陀区普*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种日本黄姑鱼鱼肉免疫调节肽的制备方法，以日本黄姑鱼肉为原料，以小鼠巨噬细胞RAW264.7相对增殖率为指标，采用响应面法优化日本黄姑鱼肉免疫活性肽的提取工艺。在单因素试验的基础上，以料液比、pH、酶解温度和酶解时间为考察因素，采用Box‑Behnken法进行四因素三水平试验设计，以日本黄姑鱼肉多肽对小鼠巨噬细胞RAW264.7相对增殖率为响应值，进行酶解工艺的条件优化。本发明为日本黄姑鱼鱼肉提取免疫活性肽奠定基础，为进一步研究日本黄姑鱼肉免疫肽的制备工艺提供参考。 | ||
| 搜索关键词： | 鱼肉 小鼠巨噬细胞 免疫调节肽 免疫活性肽 酶解 制备 单因素试验 酶解工艺 试验设计 条件优化 响应面法 制备工艺 料液比 免疫肽 多肽 参考 响应 优化 考察 研究 | ||
【主权项】：
1.一种日本黄姑鱼鱼肉免疫调节肽的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：a)预处理：日本黄姑鱼去除鱼皮、鱼鳍以及内脏后洗净，绞碎，绞碎后用乙醇脱脂若干次；脱脂后的日本黄姑鱼鱼肉离心，收集沉淀洗至无乙醇味后冷冻备用；b)酶解：在步骤a)得到的日本黄姑鱼鱼肉中加入纯水与蛋白酶，酶解2‑10h后灭酶活，冷却至室温后离心，得到上清液；c)后处理：取步骤b)得到的上清液，冷冻干燥，得到日本黄姑鱼鱼肉免疫调节肽；d)筛选：将冻干的酶解产物配成浓度为100μg/mL溶液，采用MTT法检测5组酶解产物对RAW 264.7细胞增殖的影响，并计算相对增殖率，筛选出最佳酶解的蛋白酶，采用响应面法优化日本黄姑鱼肉免疫活性肽的提取工艺。
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