[发明专利]一种日本黄姑鱼鱼肉免疫调节肽的制备方法

权利要求书

1.一种日本黄姑鱼鱼肉免疫调节肽的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：

a)预处理：日本黄姑鱼去除鱼皮、鱼鳍以及内脏后洗净，绞碎，绞碎后用乙醇脱脂若干次；脱脂后的日本黄姑鱼鱼肉离心，收集沉淀洗至无乙醇味后冷冻备用；

b)酶解：在步骤a)得到的日本黄姑鱼鱼肉中加入纯水与蛋白酶，酶解2-10h后灭酶活，冷却至室温后离心，得到上清液；

c)后处理：取步骤b)得到的上清液，冷冻干燥，得到日本黄姑鱼鱼肉免疫调节肽；

d)筛选：将冻干的酶解产物配成浓度为100μg/mL溶液，采用MTT法检测5组酶解产物对RAW 264.7细胞增殖的影响，并计算相对增殖率，筛选出最佳酶解的蛋白酶，采用响应面法优化日本黄姑鱼肉免疫活性肽的提取工艺。

2.根据权利要求1所述的一种日本黄姑鱼鱼肉免疫调节肽的制备方法，其特征在于，步骤a)中绞碎的日本黄姑鱼肉用95％乙醇、料液比为1∶6(m/v)，脱脂温度为50℃，脱脂时间为1h，脱脂次数为2次，脱脂后的日本黄姑鱼肉在4℃、12000r/min预冷的离心机离心15min。

3.根据权利要求1所述的一种日本黄姑鱼鱼肉免疫调节肽的制备方法，其特征在于，步骤b)中日本黄姑鱼鱼肉与纯水的料液比为1∶10，单位为g/mL；蛋白酶的添加量为1500U/g。

4.根据权利要求1或3所述的一种日本黄姑鱼鱼肉免疫调节肽的制备方法，其特征在于，蛋白酶为木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶与胃蛋白酶中的一种或几种。

5.根据权利要求4所述的一种日本黄姑鱼鱼肉免疫调节肽的制备方法，其特征在于，木瓜蛋白酶酶解条件为60℃，pH 6.0；胰蛋白酶酶解条件为37℃，pH 8.0；中性蛋白酶酶解条件为45℃，pH 7.0；碱性蛋白酶酶解条件为45℃，pH 10.0；胃蛋白酶酶解条件为37℃，pH2.0。

6.根据权利要求1所述的一种日本黄姑鱼鱼肉免疫调节肽的制备方法，其特征在于，步骤b)中冷却后12000r/min离心15min。

7.根据权利要求1所述的一种日本黄姑鱼鱼肉免疫调节肽的制备方法，其特征在于，步骤d)中