[发明专利]一种高产琥珀酸的大肠杆菌及其应用有效
| 申请号： | 201811156449.1 | 申请日： | 2018-09-30 |
| 公开（公告）号： | CN109251941B | 公开（公告）日： | 2020-11-06 |
| 发明（设计）人： | 刘佳;刘立明;罗秋玲;陈修来 | 申请（专利权）人： | 江南大学;无锡宸明生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12P7/46 | 分类号： | C12P7/46;C12N1/21;C12N1/20;C12R1/19 |
| 代理公司： | 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 | 代理人： | 张勇 |
| 地址： | 214000 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种高产琥珀酸生产菌株的筛选与构建方法，属于生物工程技术领域。本发明通过从骆驼瘤胃内含物中分离出生产琥珀酸的野生菌株，并对该菌株的丙酮酸激酶进行蛋白质工程改造，降低丙酮酸激酶的酶活，得到突变株的琥珀酸产量在摇瓶水平提高了26.4％，在发酵罐中厌氧发酵55h，琥珀酸产量达到80.0g/L，琥珀酸酸生产强度达到1.45g/L/h。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 高产 琥珀酸 大肠杆菌 及其 应用 | ||
【主权项】：
1.一种大肠杆菌在生产琥珀酸中的应用，其特征在于，通过抑制大肠杆菌中丙酮酸激酶的活性，提高大肠杆菌产琥珀酸的能力，具体步骤包括：(1)克隆大肠杆菌中的丙酮酸激酶基因pykA；(2)以克隆得到的pykA作为亲本，构建酶活下降的丙酮酸激酶突变体；(3)将大肠杆菌的丙酮酸激酶基因pykA替换为丙酮酸激酶突变体基因，得到重组大肠杆菌；(4)在种子培养基中活化重组菌；(5)接种活化后的重组菌到发酵培养基中发酵。
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