[发明专利]鳜鱼虹彩病毒与嗜水气单胞菌同步检测试剂盒及检测方法

摘要

本发明是一种鳜鱼虹彩病毒与嗜水气单胞菌同步检测试剂盒其组成为：反应液A，其组成包含：反应缓冲液20%；dNTPs4%；氯化镁水溶液16%；Taq DNA聚合酶2%；去离子水58%；反应液B，其组成为：ISKNV‑mcp‑F和ISKNV‑mcp‑R各占50%；反应液C，Ah‑alt‑F和Ah‑alt‑R各占50%。本发明还公开了该试剂盒进行检测的方法。本发明试剂盒具有特异性强、灵敏度高、快速且成本低、操作方法更简单，能够一次性同步检测2种病原。解决了现有技术时间长、工作量大、交叉污染、操作复杂等缺陷，能较好满足目前对鳜鱼虹彩病毒病及嗜水气单胞菌引起的败血症共感染一次性检测的迫切需要。

主权项

1.一种鳜鱼虹彩病毒与嗜水气单胞菌同步检测试剂盒，其特征在于，其组成包括：水                         14.4 μL；10×PCR缓冲液              2 μL；25mmol/L MgCl2             1.6 μL；200mmol/L 4×dNTP混合物    0.4μL；引物                       各0.2 μL；5U/μl的Taq DNA聚合酶       0.2 μL；模板DNA                    1μL；反应液A，1支，其体积百分比组成为：①反应缓冲液，20%；②dNTPs，4%，浓度为200mM/L；③氯化镁水溶液，16%，浓度为25mM；④Taq DNA聚合酶，2%，浓度为5U/μL；⑤去离子水，58%；反应液B：反应引物1，1支；其体积百分比组成为：ISKNV‑mcp‑F， 50%，浓度为10uM；ISKNV‑mcp‑R，50%，浓度为10 uM；ISKNV‑mcp‑F为：TGACCAGCGAGTTCCTTGACISKNV‑mcp‑R为：ATGCTGGGCGCAAAGTAGTA反应液C：反应引物2，1支；其体积百分比组成为：Ah‑alt‑F，50%，浓度为10uM；Ah‑alt‑R，50%，浓度为10 uM；Ah‑alt‑F为：TTCGCTGCGACAGCAGACTTAh‑alt‑R为：TGTACCTTGACGCCAGCCACG鳜鱼虹彩病毒和嗜水气单胞菌混合基因组DNA的阳性对照试样，1支；健康鳜鱼组织总DNA的阴性对照试样，1支；超纯水，1支。