[发明专利]鳜鱼虹彩病毒与嗜水气单胞菌同步检测试剂盒及检测方法在审

专利信息
申请号: 201811152897.4 申请日: 2018-09-30
公开(公告)号: CN109207636A 公开(公告)日: 2019-01-15
发明(设计)人: 张晓君;刘晓丹;高晓建;陈楠;杨辉;李席席 申请(专利权)人: 扬州大学
主分类号: C12Q1/70 分类号: C12Q1/70;C12Q1/686;C12Q1/04;C12R1/93;C12R1/01
代理公司: 连云港润知专利代理事务所 32255 代理人: 刘喜莲
地址: 225000 江*** 国省代码: 江苏;32
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摘要:
搜索关键词: 嗜水气单胞菌 鳜鱼 虹彩病毒 试剂盒 同步检测 检测 病原 氯化镁水溶液 反应缓冲液 一次性检测 一次性同步 发明试剂 交叉污染 去离子水 特异性强 灵敏度 败血症 工作量 感染
【说明书】:

发明是一种鳜鱼虹彩病毒与嗜水气单胞菌同步检测试剂盒其组成为:反应液A,其组成包含:反应缓冲液20%;dNTPs4%;氯化镁水溶液16%;Taq DNA聚合酶2%;去离子水58%;反应液B,其组成为:ISKNV‑mcp‑F和ISKNV‑mcp‑R各占50%;反应液C,Ah‑alt‑F和Ah‑alt‑R各占50%。本发明还公开了该试剂盒进行检测的方法。本发明试剂盒具有特异性强、灵敏度高、快速且成本低、操作方法更简单,能够一次性同步检测2种病原。解决了现有技术时间长、工作量大、交叉污染、操作复杂等缺陷,能较好满足目前对鳜鱼虹彩病毒病及嗜水气单胞菌引起的败血症共感染一次性检测的迫切需要。

技术领域

本发明涉及一种鱼类病毒和细菌同步检测的试剂盒,特别是一种用于鳜鱼虹彩病毒与嗜水气单胞菌的同步PCR快速检测试剂盒;本发明还涉及一种应用前述试剂盒进行检测的方法。

背景技术

鳜鱼是我国传统的名贵鱼类,随着养殖集约化程度的增高,养殖密度的增大以及养殖水环境的恶化,鳜鱼的病害问题日益突出,目前已成为威胁我国鳜鱼养殖业健康发展的主要因素。这些病害中,“传染性脾肾坏死病”(又称虹彩病毒病)及细菌引起的败血症等病害危害最为严重,已经造成重大经济损失。

鳜鱼的“虹彩病毒病”在农业部1125号公告里被列为二类动物疫病,其病原为虹彩病毒(red seabream iridovirus),患病鱼典型症状眼球突出,头部充血,尤其是口腔周围、眼、鳍基充血明显,鳃贫血而呈白色、粉红色或呈花斑状,解剖可见肝脏肿大发黄甚至发白或有许多出血点,肾脏、脾脏是病毒感染的主要器官;鳜鱼细菌性败血症病原主要为嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila),患病鱼典型症状下颌、鳃盖、眼、肛门周围和鳍条基部出现点状和块状的轻度出血,胃和肠壁有出血点、无食物,胆囊肿大,腹腔内结缔组织或脂肪充血,腹腔内有较多腹水,肠道内容物稀薄并充有气体。目前养殖生产中常常是“虹彩病毒”和“嗜水气单胞菌”共感染,对鳜鱼养殖造成了巨大的经济损失。严重制约了鳜鱼养殖业的发展。“虹彩病毒”和“嗜水气单胞菌”共感染情况传统的检验方法包括电子显微镜、光学显微镜、形态学检测、生理生化特征检测等,这些检测手段不仅工作量大,而且耗时长,已远远不能满足水产养殖生产上的诊断要求,基于虹彩病毒的mcp基因和嗜水气单胞菌的alt基因同步PCR检测,具有特异性强、灵敏度高和检测耗时短的优点,是同步快速检测鳜鱼虹彩病毒病和嗜水气单胞菌引起的败血症的有效方法,为鳜鱼疾病的分子流行病学调查提供新的检测手段。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足,提供了一种新的用于鳜鱼虹彩病毒与嗜水气单胞菌快速检测试剂盒,其灵敏度高、特异性强、操作简便,在鳜鱼处于带毒带菌状态或大规模爆发疾病之前能进行准确的检测。

本发明所要解决的另一个技术问题是提供一种应用前述试剂盒进行检测的方法。

本发明所要解决的技术问题是通过以下的技术方案来实现的。本发明是一种用于鳜鱼虹彩病毒与嗜水气单胞菌快速检测试剂盒, 其特点是,其组成为:

水 14.4 μL;

10×PCR缓冲液 2 μL;

25mmol/L MgCl2 1.6 μL;

200mmol/L 4×dNTP混合物 0.4μL;

引物 各0.2 μL;

5U/μl的Taq DNA聚合酶 0.2 μL;

模板DNA 1μL;

反应液A,1支,其体积百分比组成为:

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