[发明专利]一种基于适配体和链置换扩增反应对金黄色葡萄球菌的测定方法有效
| 申请号： | 201811121430.3 | 申请日： | 2018-09-26 |
| 公开（公告）号： | CN109207567B | 公开（公告）日： | 2021-11-12 |
| 发明（设计）人： | 周楠迪;蔡蓉凤;尹凡;田亚平 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6851 | 分类号： | C12Q1/6851;C12Q1/689;C12Q1/14;C12Q1/06 |
| 代理公司： | 无锡市大为专利商标事务所(普通合伙) 32104 | 代理人： | 时旭丹;张仕婷 |
| 地址： | 214122 江苏省无锡市滨湖区蠡湖大道*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 一种基于适配体和链置换扩增反应对金黄色葡萄球菌的测定方法，属于分析化学及食品安全和发酵分析技术领域。本发明首先构建靶标识别体系，通过金黄色葡萄球菌与适配体之间的高度亲和力，可从双链中竞争释放cDNA；然后以cDNA为模板，在溶液中加入触发引物序列，扩增出大量具有特定序列的单链DNA；加入特定发夹结构后，单链DNA与发夹结构在溶液中自组装形成特定的六边形结构；最后加入荧光染料，染料与DNA双链特异性结合，释放荧光信号。利用荧光信号与金黄色葡萄球菌数量的线性关系来计算出样品中的金黄色葡萄球菌含量。本发明通过荧光共振能量转移原理，将荧光信号与金黄色葡萄球菌数量关联，实现了对牛奶等食物样品中金黄色葡萄球菌含量的直接测定。所建立的检测方法具有检测周期短，灵敏度高，成本低，特异性强等特点。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 基于 适配体 置换 扩增 应对 金黄色 葡萄球菌 测定 方法 | ||
【主权项】：
1.一种基于适配体和链置换扩增反应对金黄色葡萄球菌的测定方法，其特征在于步骤如下：首先构建靶标识别体系，由固定于磁珠上的金黄色葡萄球菌适配体和与之部分互补的序列cDNA形成双链结构，通过金黄色葡萄球菌与适配体之间的高度亲和力，从双链中竞争释放cDNA；然后以cDNA为模板，在溶液中加入触发引物序列，采用具有特殊切割位点的Nb.bpu10I限制性内切酶和具有强链置换效应的Bsm DNA聚合酶进行偶联反应，扩增出大量具有特定序列的单链DNA；加入特定发夹结构后，单链DNA与发夹结构在溶液中自组装形成特定的六边形结构；最后加入SYBR Green I荧光染料，染料与DNA双链特异性结合，释放荧光信号；利用荧光信号与金黄色葡萄球菌数量的线性关系来计算出样品中的金黄色葡萄球菌含量。
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