[发明专利]一种基于PCR-RFLP技术鉴定广地龙的方法在审
| 申请号： | 201811116589.6 | 申请日： | 2018-09-25 |
| 公开（公告）号： | CN109295170A | 公开（公告）日： | 2019-02-01 |
| 发明（设计）人： | 黄庆;毛润乾;李志武 | 申请（专利权）人： | 广东省生物资源应用研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/683 | 分类号： | C12Q1/683;C12Q1/6888 |
| 代理公司： | 广州科粤专利商标代理有限公司 44001 | 代理人： | 胡素丽;刘明星 |
| 地址： | 510260 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种基于PCR‑RFLP技术鉴定广地龙的方法。本发明利用COI基因的通用引物进行PCR扩增，得到各蚯蚓品种的线粒体细胞色素氧化酶(COI)基因片段，并对其进行序列测序、对比，通过DNAMAN软件对不同品种蚯蚓COI片段全序列进行限制性内切酶酶切图谱分析，最终筛选到一种限制性核酸内切酶RsaI对PCR产物进行酶切，用2％的琼脂糖凝胶检测PCR产物的酶切结果，通过酶切图谱可以鉴别广地龙与其他品种。本发明操作简单可靠，可为广地龙商品的鉴定提供新的技术手段。 | ||
| 搜索关键词： | 广地龙 蚯蚓 酶切 限制性内切酶酶切图谱分析 线粒体细胞色素氧化酶 限制性核酸内切酶 琼脂糖凝胶检测 基因片段 技术手段 酶切图谱 通用引物 序列测序 全序列 鉴别 筛选 | ||
【主权项】：
1.一种基于PCR‑RFLP技术鉴定广地龙的方法，其特征在于，包括以下步骤：提取待测蚯蚓样品的基因组DNA作为模板，以COI基因的通用引物HCO2198：5’‑TAAACTTCAGGGTGACCAAAAAATCA‑3’和LCO1490：5’‑GGTCAACAAATCATAAAGATATTGG‑3’作为引物进行PCR扩增，将PCR产物纯化后用限制性内切酶RsaI进行酶切，对酶切产物进行电泳检测，若出现3个片段，则待测蚯蚓样品为广地龙。
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