[发明专利]一种比伐芦定的制备方法

摘要

本发明涉及多肽合成领域，特别涉及一种比伐芦定的制备方法。发明采用Fmoc‑Pro‑Gly‑Gly‑OH与Fmoc‑Gly‑Gly‑OH不存在侧链保护的氨基酸片段为原料，工艺简单，质量可控，易工业化生产，且通过Fmoc‑Pro‑Gly‑Gly‑OH更好的避免了Fmoc‑Pro‑Gly‑Gly‑Gly‑Gly‑OH溶解性差、重结晶困难等难点，同时避免了Bivalirudin±1Gly和Bivalirudin±2Gly的杂质产生。固相合成比伐芦定操作简单，易工业生产，采用TFA裂解，避免HF使用，安全性高，合成比伐芦定粗品纯度在93％以上，产率99％以上。采用乙酸铵溶液和乙腈进行一步纯化，TFA/水和乙腈完成二步纯化，冻干即可得到精肽纯度99.8％以上，收率58％以上，纯化工艺简单，更易于工业化大规模生产。

主权项

1.一种比伐芦定的制备方法，其特征在于，该方法具体步骤为：(1)采用Fmoc‑Leu‑Wang树脂或Fmoc‑Leu‑CTC树脂作为固相载体，加入脱保护剂，脱除树脂上的Fmoc保护基；(2)将步骤(1)中脱除Fmoc保护基的树脂在活化剂存在下，按比伐芦定序列依次偶联Fmoc保护氨基酸，获得侧链保护的比伐芦定肽树脂：R1‑D‑Phe‑Pro‑Arg(Pbf)‑X‑Y‑Asn(Trt)‑Gly‑Asp(OtBu)‑Phe‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Ile‑Pro‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Tyr(tBu)‑Leu‑树脂其中，R1为Fmoc或Boc；X为Pro‑Gly‑Gly；Y为Gly‑Gly；(3)将步骤(2)得到的侧链保护的比伐芦定肽树脂进行裂解，沉降得比伐芦定粗品；(4)将步骤(3)中的比伐芦定粗品纯化、冻干，得比伐芦定精品。