[发明专利]一种比伐芦定的制备方法

说明书

本发明涉及多肽合成领域，特别涉及一种比伐芦定的制备方法。发明采用Fmoc‑Pro‑Gly‑Gly‑OH与Fmoc‑Gly‑Gly‑OH不存在侧链保护的氨基酸片段为原料，工艺简单，质量可控，易工业化生产，且通过Fmoc‑Pro‑Gly‑Gly‑OH更好的避免了Fmoc‑Pro‑Gly‑Gly‑Gly‑Gly‑OH溶解性差、重结晶困难等难点，同时避免了Bivalirudin±1Gly和Bivalirudin±2Gly的杂质产生。固相合成比伐芦定操作简单，易工业生产，采用TFA裂解，避免HF使用，安全性高，合成比伐芦定粗品纯度在93％以上，产率99％以上。采用乙酸铵溶液和乙腈进行一步纯化，TFA/水和乙腈完成二步纯化，冻干即可得到精肽纯度99.8％以上，收率58％以上，纯化工艺简单，更易于工业化大规模生产。

技术领域

本发明涉及多肽原料药制备领域，特别涉及一种比伐芦定的制备方法。

背景技术

比伐芦定，英文通用名称为Bivalirudin，商品名为Angiomax，是一种直链线性二十肽，其分子结构式如下：

氨基酸序列如下：

D-Phe-Pro-Arg-Pro-Gly-Gly-Gly-Gly-Asn-Gly-Asp-Phe-Glu-Glu-Ilu-Pro-Glu-G lu-Tyr-Leu

分子式：C₉₈H₁₃₈N₂₄O₃₃，分子量：2180.32，CAS：128270-60-0。

注射用比伐芦定(商品名：Angiomax)是满足FDA要求的多肽类产品，比伐芦定为直接的、特异的、可逆的凝血酶抑制剂，作为抗凝剂用于成人择期经皮冠状动脉介入治疗(PCI)。比伐芦定(bivalirudin)，由美国制药公司(The Medicines Company)出品。2000年12月经FDA批准上市。

比伐芦定是凝血酶的直接抑制剂，与游离及血栓上凝血酶的催化位点和阴离子外结合位点特异结合起抑制作用。凝血酶是一种丝氨酸蛋白酶，在血栓形成过程中起重要的作用，它首先将纤维蛋白原分解为纤维蛋白单体，然后将凝血酶因子XIII激活为XIIIa，使纤维蛋白之间共价连接成为稳定的网架，形成血栓。凝血酶同时还可激活凝血酶因子V和VIII，进一步促进凝血酶的形成，还可激活血小板导致血小板凝聚，释放血小板聚集物。比伐芦定与凝血酶的结合过程是可逆的，凝血酶通过缓慢的酶解比伐芦定Arg3-Pro4之间的肽键可使凝血酶恢复原来的生物活性。体外研究表明，比伐芦定不仅能抑制游离的凝血酶，还能抑制与血块结合的凝血酶而不会被血小板释放出的物质中和，它能延长正常人血浆激活的部分促凝血酶原激酶时间(aPTT)、凝血酶时间(TT)和凝血酶原时间(PT)，并与比伐芦定的浓度呈线性关系，但临床应用是否存在这种相关性尚不清楚。