[发明专利]一种高效的链霉菌基因组精简系统的构建及应用在审
| 申请号： | 201811027547.5 | 申请日： | 2018-09-04 |
| 公开（公告）号： | CN109161559A | 公开（公告）日： | 2019-01-08 |
| 发明（设计）人： | 李永泉;毛旭明;卜庆廷;俞品 | 申请（专利权）人： | 浙江大学 |
| 主分类号： | C12N15/76 | 分类号： | C12N15/76;C12N15/66 |
| 代理公司： | 杭州求是专利事务所有限公司 33200 | 代理人： | 赵杭丽 |
| 地址： | 310058 浙江*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明提供一种高效的链霉菌基因组精简系统的构建及应用，本发明的链霉菌基因组精简系统是在全基因组比对分析大片段冗余基因区的基础上，组合了同源重组系统和高效的位点特异性重组系统(Cre/loxP系统)进行靶向大片段缺失。同源重组系统中采用了基于自杀载体的同源重组策略，大大提高了敲除的靶向性和效率，用于一次性缺失约700Kb的冗余基因区时效率高达100％。本发明方法操作简单、高效、靶向性强、正确率高。本发明为构建链霉菌底盘细胞奠定了理论基础，有利于实现合成生物学底盘细胞的高效构建，为药物产业化和新药研发提供强大支撑。 | ||
| 搜索关键词： | 链霉菌 构建 基因组 同源重组系统 冗余基因 靶向性 底盘 位点特异性重组系统 大片段缺失 合成生物学 细胞 比对分析 理论基础 全基因组 同源重组 新药研发 自杀载体 产业化 一次性 正确率 靶向 敲除 区时 应用 大片 支撑 | ||
【主权项】：
1.一种高效的链霉菌基因组精简系统的构建，其特征在于，通过全基因组比对技术分析、定位链霉菌基因组中的大片段冗余基因区，构建链霉菌敲除质粒pKClox6、链霉菌自杀质粒pSETlox71及链霉菌表达质粒pNitCre，其中，敲除质粒pKClox66携带lox66位点，链霉菌温度敏感型复制子pSG5，Apra抗性；自杀质粒pSETlox71携带lox71位点，无链霉菌复制子，Spect抗性；表达质粒pNitCre携带链霉菌密码子优化的Cre重组酶，链霉菌游离型复制子pIJ101，Apra抗性。
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