[发明专利]食用肉类鉴别阳性对照品及其制备方法和应用在审
| 申请号： | 201810922068.3 | 申请日： | 2018-08-14 |
| 公开（公告）号： | CN108977552A | 公开（公告）日： | 2018-12-11 |
| 发明（设计）人： | 艾金霞;孙丽媛;高丽君;李明成;周亭亭;王艳双;张丽华;段思琪;刘玟妍 | 申请（专利权）人： | 北华大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6888 | 分类号： | C12Q1/6888;C12Q1/6806 |
| 代理公司： | 广州新诺专利商标事务所有限公司 44100 | 代理人： | 李海恬;李小林 |
| 地址： | 132113 吉林*** | 国省代码： | 吉林;22 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种食用肉类鉴别阳性对照品及其制备办法和应用，属于PCR鉴别技术领域。该对照品的制备方法包括以下步骤：S1扩增：取经确证的牛、羊、猪、鸡、鸭和驴肉中的至少一种，分别用对应的引物对进行PCR扩增，以琼脂糖凝胶电泳分析扩增结果，分别回收特异性DNA条带；S2纯化：上述特异性DNA条带以吸附柱进行纯化；S3连接：纯化DNA产物与载体进行连接；S4转化：连接产物分别转化至大肠杆菌感受态细胞，获得转化细菌；S5培养：转化细菌涂板培养后进行阳性克隆菌落的筛选，挑取阳性菌落进行扩增，即得阳性对照品。上述食用肉类鉴别阳性对照品与常规肉类鉴别时采用的经鉴定阳性对照品相比，具有DNA信息明确、稳定、便于保存的优点，可作为标准物质使用。 | ||
| 搜索关键词： | 阳性对照品 肉类鉴别 扩增 特异性DNA 食用 转化 条带 制备 细菌 大肠杆菌感受态细胞 琼脂糖凝胶电泳 制备方法和应用 阳性克隆菌落 标准物质 连接产物 涂板培养 阳性菌落 对照品 吸附柱 驴肉 引物 筛选 回收 保存 应用 分析 | ||
【主权项】：
1.一种食用肉类鉴别阳性对照品的制备办法，其特征在于，包括以下步骤：S1扩增：取经确证的牛、羊、猪、鸡、鸭和驴肉中的至少一种，分别用下述对应的引物对进行PCR扩增；牛：上游引物：5'‑TCCATCAAACATCTCATCTTGATGAAA‑3'下游引物：5'‑GAAAAGTGTAAGACCCGTAATATAAG‑3'羊：上游引物：5'‑TCCATCAAACATCTCATCTTGATGAAA‑3'下游引物：5'‑TATGAATGCTGTGGCTATTGTCGCA‑3'猪：上游引物：5'‑TCCATCAAACATCTCATCTTGATGAAA‑3'下游引物：5'‑GCTGATAGTAGATTTGTGATGACCG‑3'鸡：上游引物：5'‑TCCATCAAACATCTCATCTTGATGAAA‑3'下游引物：5'‑GATACAGATGAAGAAGAATGAGGCG‑3'鸭：上游引物：5'‑GGCTTCTACTACGGCTCCTA‑3'下游引物：5'‑TCTGGTTTGATGTGTGGTGG‑3'驴：上游引物：5'‑TCGAATGAATCTGAGGTGGA‑3'下游引物：5'‑ACATGTGTAGGGTAGGGATG‑3'取上述PCR产物，以琼脂糖凝胶电泳分析扩增结果，分别回收牛、羊、猪、鸡、鸭和驴肉的特异性DNA条带；S2纯化：取上述获得的特异性DNA条带，以吸附柱进行纯化，分别得牛、羊、猪、鸡、鸭和驴肉的纯化DNA产物；S3连接：取上述获得得纯化DNA产物与载体进行连接；S4转化：将上述连接产物分别转化至大肠杆菌感受态细胞，获得转化细菌；S5培养：将上述转化细菌涂板培养后进行阳性克隆菌落的筛选，挑取阳性菌落进行扩增，提取质粒，电泳鉴定得到特异性条带，即得阳性对照品。
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