[发明专利]一种用于靶序列检测的荧光PCR引物、探针和检测方法

摘要

本发明公开了一种用于靶序列检测的荧光PCR引物、探针和检测方法。本发明包括正向引物、反向引物、荧光受体杂交探针和荧光供体标签探针，所述的荧光受体杂交探针包括与待检测核酸序列互补的序列。取消通用引物上的荧光供体基团，将荧光供体基团改在检测探针上，引入一条位于PCR扩增后两条引物之间的区域的靶序列特异性探针，将受体荧光基团修饰在靶序列特异性探针的近供体荧光基团端，只有PCR扩增的是目标靶序列时，荧光受体杂交探针才能结合在非对称PCR的产物上，荧光共振转移才能发生，从而避免了引物二聚体或PCR误扩增造成的假阳性，显著提高了特异性。

主权项

1.一种多重荧光PCR检测引物和探针，其特征在于，包括正向引物、反向引物、荧光杂交探针和荧光标签探针；所述的荧光杂交探针包括与待检测核酸序列互补的序列，所述的正向引物包括正向富集引物，正向富集引物的3’端与待检测核酸序列的上游序列反向互补，所述的反向引物包括顺序相连的荧光标签部位和反向富集引物，所述的反向富集引物的3’端与待检测核酸序列的下游序列反向互补，5’端与荧光标签部位的3’端结合，所述的荧光标签探针包括与反向引物中的荧光标签部位互补的序列和修饰该序列的供体荧光基团或受体荧光基团；或所述的反向引物包括反向富集引物，反向富集引物的3’端与待检测核酸序列的下游序列反向互补，所述的正向引物包括顺序相连的荧光标签部位和正向富集引物，所述的正向富集引物的3’端与待检测核酸序列的上游序列反向互补，5’端与荧光标签部位的3’端结合，所述的荧光标签探针包括与正向引物中的荧光标签部位互补的序列和修饰该序列的供体荧光基团或受体荧光基团。