[发明专利]一种基于DNA组装的恒温条件下同时检测多种microRNA的探针和方法

摘要

本发明公开了一种基于DNA组装的恒温条件下同时检测多种microRNA的探针和方法；本发明探针包括3条探针组；3条探针组和目标microRNA能够自组装形成稳定的“工”字形结构；再结合限制性内切酶的高特异性和对单链DNA切割特性，实现具有非序列依赖性的核酸酶功能的DNA模块，应用于恒温条件下多种miRNA的同时荧光检测。解决常规恒温扩增方法体系复杂问题，为多种miRNA同时灵敏检测提供新方法。本方法仅需添加限制性内切酶和设计简单的探针在不需添加dNTPs条件下即可实现恒温信号扩增检测核酸，且具有良好精确性，重复性和稳定性，适宜发展为试剂盒并向市场推广。

主权项

1.一种检测microRNA的探针组，所述探针组包括Y‑1n、Y‑2n和荧光探针LP；探针Y‑1n、Y‑2n、LP和目标microRNA能够自组装形成稳定的“工”字形结构；探针Y‑1n中间的部分碱基与Y‑2n中间的部分碱基反向互补配对，形成“工”字形中间部分的茎部序列；探针Y‑1n、Y‑2n的另一部分碱基序列与目标microRNA的两端序列分别反向互补配对，形成“工”字形一端的“一”字形头部；探针Y‑1n、Y‑2n中还存在能与荧光探针LP两端序列分别发生反向互补配对的碱基序列，形成“工”字形另一端的“一”字形头部；荧光探针LP与目标microRNA不能配对结合；荧光探针LP能被切刻内切酶切割；荧光探针LP两端分别连有报告荧光基团、淬灭荧光基团。