[发明专利]一种表达和纯化Her2全长蛋白的方法以及Her2全长蛋白的应用在审
| 申请号： | 201810814041.2 | 申请日： | 2018-07-23 |
| 公开（公告）号： | CN109734799A | 公开（公告）日： | 2019-05-10 |
| 发明（设计）人： | 王海瑶;张永顶;马伟民 | 申请（专利权）人： | 深圳市伯劳特生物制品有限公司 |
| 主分类号： | C07K14/82 | 分类号： | C07K14/82;C12N15/85;A01K67/033;G01N33/68;G01N33/577;G01N33/574 |
| 代理公司： | 深圳市深佳知识产权代理事务所(普通合伙) 44285 | 代理人： | 王仲凯 |
| 地址： | 518000 广东省深圳市南山*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明涉及酶联免疫技术领域，公开了一种表达和纯化Her2全长蛋白的方法以及Her2全长蛋白的应用。本发明以果蝇卵细胞作为表达Her2全长蛋白的宿主细胞，联合适宜的昆虫细胞表达载体、筛选方法、细胞传代扩增方法以及蛋白纯化方法组成系统的Her2全长蛋白表达纯化方法，获得了毫克级以上的目标蛋白，并具备较佳的抗原性和与抗Her2单抗结合的特异性，可通过夹心ELISA法有效识别血清中Her2的含量，对乳腺癌的诊断分型和预后有重要指导作用。 | ||
| 搜索关键词： | 全长蛋白 表达和纯化 昆虫细胞表达载体 酶联免疫技术 重要指导作用 夹心ELISA法 蛋白纯化 目标蛋白 宿主细胞 细胞传代 有效识别 诊断分型 抗原性 血清 预后 乳腺癌 单抗 果蝇 扩增 应用 筛选 联合 | ||
【主权项】：
1.一种表达和纯化Her2全长蛋白的方法，其特征在于，包括：步骤1、合成Her2全基因，并在全基因两端设计酶切位点，通过酶切连接至昆虫细胞表达载体，获得重组载体；步骤2、将所述重组载体转染至果蝇卵细胞中，通过筛选获得稳定表达Her2全长蛋白的果蝇卵细胞；步骤3、将所述果蝇卵细胞传代扩增至细胞浓度为2*106个/ml时，离心去掉上清液，留存细胞；步骤4、用含500uM硫酸铜诱导剂的无血清培养基重悬细胞，并诱导表达72小时，收集上清表达液；步骤5、上清表达液进行Ni‑NTA蛋白纯化，获得Her2全长蛋白。
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