[发明专利]猫干扰素γ的可溶性原核表达和纯化方法及应用有效
| 申请号： | 202110426900.2 | 申请日： | 2021-04-20 |
| 公开（公告）号： | CN113121672B | 公开（公告）日： | 2023-01-03 |
| 发明（设计）人： | 魏衍全;张勇;成述儒;武小椿;任丽君 | 申请（专利权）人： | 甘肃农业大学 |
| 主分类号： | C07K14/57 | 分类号： | C07K14/57;C12N15/70;C12N15/62;C12N15/64;C12N1/21;C07K1/22;C12R1/19 |
| 代理公司： | 深圳国联专利代理事务所(特殊普通合伙) 44465 | 代理人： | 钟志芸 |
| 地址： | 730000 *** | 国省代码： | 甘肃;62 |
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| 摘要： | 本发明提供了猫干扰素γ的可溶性原核表达和纯化方法及应用，属于生物基因工程领域。该方法包括的步骤有：⑴FeIFN‑γ蛋白的信号肽序列和理化性质分析；⑵原核表达质粒pET28a‑SUMO‑FeIFN‑γ的构建；⑶含重组质粒的BL21细菌的诱导表达与重组蛋白的可溶性分析；⑷SUMO‑FeIFN‑γ融合蛋白最佳表达条件的筛选；⑸SUMO‑FeIFN‑γ融合蛋白的大量表达和纯化；⑹SUMO‑FeIFN‑γ融合蛋白的酶切和纯化。本发明克隆不包含信号肽的成熟蛋白基因序列，构建了原核表达质粒，并转化BL21感受态细胞进行表达和纯化，使用了带有SUMO助溶标签的pET28a‑SUMO表达载体，从而实现了目的蛋白的可溶性表达，外源蛋白的可溶性表达水平高，具备很高的生物学活性，纯化步骤简便，为后期抗病毒药物的开发奠定了基础。 | ||
| 搜索关键词： | 干扰素 可溶性 表达 纯化 方法 应用 | ||
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- 本发明公开了一种黑青斑河鲀干扰素蛋白IFNγ2，其氨基酸序列如SEQIDNO:1所示，该蛋白的编码基因，核苷酸序列如SEQIDNO:2所示，编码基因的制备方法，是用序列用SEQIDNO:4和SEQIDNO:5序列为引物克隆得到干扰素蛋白IFNγ2的编码基因；同时还公开了干扰素蛋白IFNγ2的制备方法，是将黑青斑河鲀干扰素IFNγ2的编码基因克隆至表达载体，得到重组表达质粒，转化大肠杆菌，培养转化的大肠杆菌，经诱导后收集菌体，纯化、酶切，得到黑青斑河鲀干扰素IFNγ2。本发明的黑青斑河鲀干扰素IFNγ2可以用于制备鱼类免疫调节添加剂或免疫佐剂，具有诱导鱼类免疫基因表达的作用。
- 一种大肠杆菌重组鸡α-γ二价干扰素及其制备方法-200910256418.8
- 郝智慧;宋丽;贾德强;张瑞丽;邱梅;王春元 - 青岛康地恩药业有限公司;青岛六和药业有限公司
- 2009-12-25 - 2011-06-29 - C07K14/57
- 本发明涉及一种大肠杆菌重组鸡α-γ二价干扰素及其制备方法。本发明的目的在于提供一种抗肿瘤效果好、提高畜禽免疫力的，能够在短时间内实现控制病情的干扰素。其组分为：大肠杆菌重组鸡α-扰素、大肠杆菌鸡γ-干扰素；其制备方法为：基因设计，表达载体构建，诱导表达，目的蛋白质纯化及活性检测即得。该药品为畜禽病毒病治疗替代药物，利用大肠杆菌表达鸡α-扰素、鸡γ-干扰素，具有广谱的抗病毒作用。通过纯化蛋白后具有免疫调节活性和一定的抗病毒活性，二者联合应用于临床具有明显的协同作用。本发明制成的二价干扰素可优于单独应用任何一种干扰素对新城疫和法氏囊病的治疗和预防效果。
- 猪γ干扰素及其编码基因与应用-200710120248.1
- 刘文军;杨利敏;孙蕾 - 中国科学院微生物研究所
- 2007-08-14 - 2008-03-12 - C07K14/57
- 本发明公开了一种猪γ干扰素及其编码基因与应用。该猪γ干扰素，是具有下述氨基酸残基序列之一的蛋白质：1)序列表中的SEQ ID №：1；2)将序列表中SEQID №：1的氨基酸残基序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有α干扰素相关功能的蛋白质。本发明猪γ干扰素可作为活性成分制备猪病毒感染性疾病的抗感染药物。本发明的设计合成的在大肠杆菌能高效表达猪γ干扰素编码基因，在大肠杆菌中高效表达，表达量达菌体总蛋白的60％以上，周期短，成本低。
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