[发明专利]测定生物样本中特异位点DNA甲基化水平的方法及其应用在审
| 申请号： | 201810665835.7 | 申请日： | 2018-06-26 |
| 公开（公告）号： | CN110643702A | 公开（公告）日： | 2020-01-03 |
| 发明（设计）人： | 胡立夫;陈琦;梁昊原;谷东风;周晓莹 | 申请（专利权）人： | 深圳市圣必智科技开发有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6886 | 分类号： | C12Q1/6886;C12Q1/6883 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 518057 广东省深圳市南山区科技*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开一种测定生物样本中特异位点DNA甲基化水平的方法及其应用。该方法包括步骤：获取生物样本，并提取生物样本中的待测DNA片段；修饰待测DNA片段，将待测DNA片段中未发生甲基化的胞嘧啶脱氨基转变成尿嘧啶；以修饰后的DNA片段为模板DNA片段，以第一引物和第二引物分别从模板DNA片段两侧对模板DNA片段进行PCR扩增；处理经过PCR扩增后的PCR产物，去除多余的第一引物、第二引物和dNTPs，并纯化回收；检测待测DNA片段CpG位点的甲基化和去甲基化荧光偏振值；根据待测DNA片段CpG位点的甲基化和去甲基化荧光偏振值计算待测DNA片段的甲基化水平。实施本发明，具有简便、快捷、高通量、低成本、无需分离纯化等优点，适合大量检测临床珍贵的低浓度DNA样本的甲基化。 | ||
| 搜索关键词： | 甲基化 生物样本 模板DNA 第二引物 第一引物 去甲基化 荧光偏振 修饰 甲基化水平 分离纯化 胞嘧啶 低成本 高通量 尿嘧啶 脱氨基 检测 去除 位点 回收 应用 | ||
【主权项】：
1.一种测定生物样本中特异位点DNA甲基化水平的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：/n获取生物样本，并提取生物样本中的待测DNA片段；/n采用亚硫酸氢钠修饰待测DNA片段，将待测DNA片段中未发生甲基化的胞嘧啶脱氨基转变成尿嘧啶；/n以亚硫酸氢钠修饰后的DNA片段为模板DNA片段，以第一引物和第二引物分别从模板DNA片段两侧对模板DNA片段进行PCR扩增，所述第一引物和第二引物扩增的模板DNA片段包括待测DNA片段的CpG位点；/n采用碱性磷酸酶处理经过PCR扩增后的PCR产物，去除多余的第一引物、第二引物和dNTPs，并纯化回收；/n分别取等量纯化后的PCR产物，在两个单独的反应体系中分别进行甲基化特异第三引物引导的单碱基延伸标记反应，检测待测DNA片段CpG位点的甲基化和去甲基化荧光偏振值；/n根据待测DNA片段CpG位点的甲基化和去甲基化荧光偏振值计算待测DNA片段的甲基化水平。/n
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