[发明专利]一种基于CRISPR-Cas9系统构建的能分泌小鼠白细胞介素-6的基因工程细胞株在审
| 申请号： | 201810467123.4 | 申请日： | 2018-05-16 |
| 公开（公告）号： | CN108624622A | 公开（公告）日： | 2018-10-09 |
| 发明（设计）人： | 艾立平;蒋明贵 | 申请（专利权）人： | 湖南艾佳生物科技股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/90 | 分类号： | C12N15/90;C12N9/22;C12N5/10;C12N15/06;C12P21/08 |
| 代理公司： | 北京路浩知识产权代理有限公司 11002 | 代理人： | 王文君;陈征 |
| 地址： | 410013 湖南省*** | 国省代码： | 湖南;43 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | 本发明提供了一种基于CRISPR‑Cas9系统构建的能分泌小鼠白细胞介素‑6的基因工程细胞株。本发明首先提供了特异性靶向小鼠ROSA26基因的sgRNA，其靶序列如SEQ ID NO.1所示，进而构建能同时表达所述sgRNA和Cas9蛋白的定点切割载体；本发明还构建了含有小鼠白细胞介素‑6和ROSA26基因同源序列的donor载体，在小鼠细胞SP2/0的ROSA26位点定点整合小鼠白细胞介素‑6，并通过筛选标记筛选获得纯合细胞系，获得高表达小鼠白细胞介素‑6的基因工程细胞株，本发明的细胞株可用于生产具有高比例分泌能力的杂交瘤细胞，在单克隆抗体制备领域具有广阔的应用前景。 | ||
| 搜索关键词： | 小鼠 白细胞介素 基因工程细胞株 分泌 系统构建 构建 基因同源序列 单克隆抗体 特异性靶向 杂交瘤细胞 定点整合 筛选标记 小鼠细胞 靶序列 高表达 细胞株 纯合 可用 位点 制备 切割 蛋白 筛选 基因 应用 生产 | ||
【主权项】：
1.一种基于CRISPR‑Cas9系统构建的能分泌小鼠白细胞介素‑6的基因工程细胞株的制备方法，包括以下步骤：(1)构建能同时表达sgRNA和Cas9蛋白的定点切割载体；(2)构建了含有小鼠白细胞介素‑6基因和ROSA26基因同源序列的donor载体；(3)将定点切割载体和donor载体转入小鼠细胞SP2/0骨髓瘤细胞，筛选阳性克隆，鉴定即得。
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于湖南艾佳生物科技股份有限公司，未经湖南艾佳生物科技股份有限公司许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/patent/201810467123.4/，转载请声明来源钻瓜专利网。
