[发明专利]采用AMF单个孢子微量DNA进行PCR预处理的方法

摘要

本发明采用AMF单个孢子微量DNA进行PCR预处理的方法，是通过湿筛倾析AMF孢子；剪出小方片放置在无菌滤纸上；在小方片上扎出小坑；挑取未开裂的AMF孢子放在小坑内；用微量注射器针头压碎孢子并注射无菌甘油清洗掉残留在针头上的单个孢子内含物；将带有AMF单个孢子破碎物与甘油的小方片放入PCR管底部，再加入PCR所需要的正反引物、Taq酶和PCR级别的无菌水，快速离心，即可进行PCR。无菌甘油快捷地清洗可能沾有AMF单个孢子内含物的针头，加之甘油又能提高微量DNA的PCR扩增效率，将AMF单个孢子DNA等内含物暴露在无菌小方片上，可直接将其放入PCR管底部，与PCR的其他反应液接触，进行PCR反应。所涉及的装置易获得，可重复利用，操作简单，可行性高，成本低廉。

主权项

1.采用AMF单个孢子微量DNA进行PCR预处理的方法，其特征在于所采用的技术方案是：a.通过湿筛倾析获得若干个AMF孢子，将一定数量的AMF孢子在无菌水中超声清洗，抽滤在无菌滤纸上，并放置于超净工作台内，以下步骤均在超净工作台内进行；b.用灭菌的剪刀将无菌PCR管盖剪出一个平整的小方片，放置在无菌滤纸上；c.将无菌滤纸放置在解剖镜载物台上，使用火焰灭菌的微量注射器针头在小方片上扎出一个小坑；d.使用火焰灭菌的解剖针挑取一个饱满未开裂的AMF孢子放在小坑内；e.用微量注射器吸取无菌甘油，在解剖镜下利用微量注射器的针头将AMF单个孢子在小坑内压碎，然后推出无菌甘油，以清洗掉残留在针头上的单个孢子内含物；f.用火焰灭菌的镊子将带有AMF单个孢子破碎物与甘油的小方片放入PCR管底部，完成预处理过程，再加入PCR所需要的正反引物、Taq酶和PCR级别的无菌水，快速离心，即可进行PCR。