[发明专利]采用AMF单个孢子微量DNA进行PCR预处理的方法有效
| 申请号： | 201810264938.2 | 申请日： | 2018-03-28 |
| 公开（公告）号： | CN108504726B | 公开（公告）日： | 2021-10-26 |
| 发明（设计）人： | 胡文涛;唐明;陈辉 | 申请（专利权）人： | 华南农业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/686 | 分类号： | C12Q1/686;C12Q1/689;C12Q1/04;C12R1/645 |
| 代理公司： | 西安智萃知识产权代理有限公司 61221 | 代理人： | 李炳辉 |
| 地址： | 510642 广东省广州市天*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 采用 amf 单个 孢子 微量 dna 进行 pcr 预处理 方法 | ||
【权利要求书】：
1.采用AMF单个孢子微量DNA进行PCR预处理的方法，其特征在于所采用的技术方案是：
a.通过湿筛倾析收集菌根植物根系以及根际土中的AMF孢子，在体式显微镜下挑取100个AMF孢子于含有0.5mL无菌水的1.5mL离子管中超声清洗10min，抽滤在无菌滤纸上，并放置于超净工作台内；
b.用灭菌的剪刀将无菌PCR管盖剪出一个2×2mm平整的小方片，放置在无菌滤纸上；
c.将无菌滤纸放置在解剖镜载物台上，使用火焰灭菌的微量注射器针头在小方片上扎出一个0.5mm深的小坑；
d.使用火焰灭菌的解剖针挑取一个饱满未开裂的AMF孢子放置于小坑内；
e.用微量注射器吸取1μL无菌甘油，在解剖镜下使用微量注射器的针头将AMF单个孢子在小坑内压碎，然后推出1μL无菌甘油，以清洗掉残留在针头上的单个孢子内含物；
f.用火焰灭菌的镊子将带有AMF单个孢子破碎物与甘油的小方片放入PCR管底部，完成预处理过程，再加入PCR所需要的浓度为10mM的正反引物各0.5μL、10μL 2×Taq酶mix和8μLPCR级别的无菌水，快速离心，即可进行PCR。
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