[发明专利]能检测多种猪猝死症病原的多重连接探针扩增鉴别试剂盒

摘要

本发明涉及生物检测技术，旨在提供一种能检测多种猪猝死症病原的多重连接探针扩增鉴别试剂盒。该试剂盒包括：反转录和预扩增引物混合液、探针混合液、MLPA缓冲液、连接缓冲液A、连接缓冲液B、连接酶Ligase‑65、PCR反应混合液、SALSA聚合酶、阴性对照、阳性对照。与现有技术相比，本发明具有高通量、特异性好和灵敏度高的特点。能同时检测6种引起猪猝死的病原，利用全自动核酸分析仪每次可同时检测96个样品。通过探针设计、序列比对和blast分析，确保探针只与目标基因相结合。进行检测时只从对应模板中扩增出相应大小的目的片段，对其他病原并无扩增。通过增加RT‑PCR这一步骤对目标基因进行富集，最低可检出1拷贝的目标基因。

主权项

1.一种能检测多种猪猝死症病原的多重连接探针扩增鉴别试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括：(1)反转录和预扩增引物混合液；该混合液中包括序列SEQ ID NO：1～9所示的用于猪繁殖与呼吸道综合征病毒、猪瘟病毒、尼帕病毒的反转录引物和非洲猪瘟病毒、产气荚膜梭菌和猪胸膜肺炎放线杆菌的预扩增引物；(2)探针混合液；该混合液中包括序列SEQ ID NO：10～21所示的用于检测猪繁殖与呼吸道综合征病毒、猪瘟病毒、尼帕病毒、非洲猪瘟病毒、产气荚膜梭菌和猪胸膜肺炎放线杆菌的左侧和右侧探针；(3)MLPA缓冲液；(4)连接缓冲液A；(5)连接缓冲液B；(6)连接酶Ligase‑65；(7)PCR反应混合液，该混合液中包括序列SEQ ID NO:22和23所示通用引物；(8)SALSA聚合酶；(9)阴性对照；(10)阳性对照。