[发明专利]一种预测弱畸精子症体外受精能力的方法

摘要

本发明公开了一种预测弱畸精子症体外受精能力的方法，包括精液处理、精液浓缩和精子活力的测定三个步骤。本发明可以对于将行体外受精的精子的受精能力进行一个快速有效的预判，能够在短时间内对于精子，特别是弱畸精子，提前预测精子的受精能力，防止受精失败。

主权项

1.一种预测弱畸精子症体外受精能力的方法，其特征在于，包括如下步骤：A、精液处理1）收集新鲜精液，并将精液放置于37℃培养箱中液化30min；2）用1ml的移液枪吸取1ml梯度分离液的lower液，再用1ml的移液枪吸取1ml梯度分裂液中的upper液，贴壁加到lower液上方。将液化完全的新鲜精液加入精子梯度分离液upper液的上方，采用非连续密度梯度离心法离心，300g离心20min，离心结束后弃去上清液,保留沉淀；3）用1ml的移液枪吸取4ml含10%血清蛋白替代品的授精输卵管培养液加入第2）步得到的沉淀里，用移液枪吹打混匀，采用非连续密度梯度离心法进行离心，500g离心5min，离心结束后弃去上清液，保留沉淀；4）用1ml的移液枪吸取0.3ml含10%血清蛋白替代品的授精输卵管培养液贴壁加入第3）步中得到的沉淀上方，并放置于37℃、二氧化碳浓度设定为5.5%的培养箱中上游30min，然后用1ml的移液枪吸出250μl的上清液放入5ml小试管中；B、精液浓缩1）用10μl的移液枪吸取5μl步骤A 第4）步中的精液于精子计数板上进行计数，统计精子的密度ρ；2）用100μl的移液枪吸取50μl步骤A第4）步中上游完成的精液放入0.5ml离心管中，采用混合离心法进行离心，500g离心5min，离心结束后弃去上清液；3）向沉淀中加入10～25μl的含10%血清蛋白替代品的授精输卵管培养液，授精输卵管培养液的添加量V根据精子的密度ρ计算，具体计算方法如下：V＝ρ×50μl／（40 x106个/ml）C、精子活力的测定1）用10μl的移液枪吸取5μl步骤B中浓缩后的精液于精子计数板上进行计数，统计前向运动精子的比例；2）分别用10μl的移液枪吸取2.5μl步骤A 第4）步中的精液和7.5μlPVP 7% solution放置于0.5ml离心管中，充分吹打，将混合溶液充分混匀并放置于37℃、二氧化碳浓度为5.5%的培养箱中静置10min；3）用10μl的移液枪吸取5μl步骤2）中的精液于精子计数板上进行计数，统计前向运动精子的比例；4）将步骤1）中统计出的前向运动精子的比例与步骤3）中统计出的前向运动精子的比例进行对比即可。