[发明专利]一步逆转录模板转换PCR

摘要

本发明提供了用于更快、更容易，且具有高特异性地进行一步逆转录模板转换PCR的技术。本发明提供了使用经修饰的寡核苷酸引物扩增RNA的至少一部分区域的核酸扩增方法，所述核酸扩增方法的特征如下：核酸扩增反应包括逆转录步骤a)，其中RNA用作模板，模板转换步骤b)，其中将模板转换寡核苷酸加入到步骤a)中合成的cDNA中，和DNA扩增步骤c)，其中通过PCR进行DNA扩增，其中步骤b)中合成的模板转换cDNA用作模板；步骤a)至c)在同一反应体系中的单个阶段中进行；该经修饰的寡核苷酸在逆转录步骤a)中引物功能部分地封闭或完全地封闭，并在DNA扩增步骤c)中清除引物功能的封闭。

主权项

1.一种扩增靶RNA的至少一部分区域的方法，所述方法包括以下步骤：a)混合所述靶RNA、逆转录所需的试剂、模板转换所需的试剂和聚合酶链反应所需的试剂，并使混合物经历发生逆转录的条件以提供cDNA，所述cDNA包含模板转换寡核苷酸以及与所述靶RNA对应的核酸序列；和b)使步骤a)中获得的所述cDNA经历发生聚合酶链反应的条件，以扩增所述cDNA的至少一部分区域；其中，所述聚合酶链式反应所需的试剂包含经修饰的寡核苷酸引物，所述经修饰的寡核苷酸引物设计成在步骤a)中引物功能部分地封闭或完全地封闭，并设计成在步骤b)中清除引物功能的封闭。