[发明专利]用于确定幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)的方法

摘要

本发明涉及一种用于确定从个体分离的生物样品中的幽门螺杆菌的体外方法。此外，本发明的方法还使得能够确定幽门螺杆菌的抗生素抗性。本发明的另一方面涉及用于进行所述方法的试剂盒。

主权项

1.一种用于确定从个体分离的生物样品中的幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)和/或用于确定所述幽门螺杆菌对至少一种抗生素的抗性的体外方法，所述方法包括以下步骤：I.获得从个体分离的生物样品；II.从所述样品纯化(分离)DNA；和III.扩增幽门螺杆菌的至少一个基因的至少一部分，所述至少一个基因的至少一部分包含负责对所述抗生素的抗性的至少一个突变位点，所述扩增通过实时PCR，使用至少一对寡核苷酸(引物对)和至少两种寡核苷酸探针进行，其中所述引物对在跨越所述突变位点的DNA区域中杂交，且其中每种寡核苷酸探针在5’和3’末端用两种不同标记物标记，并且其中至少一种寡核苷酸探针与所述基因的野生型等位基因的至少一个基因部分互补并对该基因部分是特异性的，并且至少一种寡核苷酸探针与所述基因的负责所述抗生素抗性的突变等位基因的至少一个基因部分互补并对该基因部分是特异性的；IV.通过以优选地PCR循环阈值测量标记所述寡核苷酸探针的标记物的水平，来定量扩增的野生型和/或突变的DNA，其中仅标记与所述野生型等位基因的至少一个基因部分互补并对该基因部分特异的探针的标记物的存在界定了正常的纯合基因型，且因此界定了对所述抗生素无抗性的所述Hp的存在；仅标记与所述基因的突变等位基因的至少一个基因部分互补并对该基因部分特异的探针的标记物的存在界定了突变的纯合基因型，且因此界定了对所述抗生素具有抗性的所述Hp的存在；并且两种标记物的存在界定了具有所述基因的野生型等位基因和突变等位基因的杂合基因型，且因此界定了对所述抗生素具有抗性的所述Hp的存在。