[发明专利]一种利用SOL技术和化学发光技术对血清miRNA标志物进行定量检测的方法

摘要

本发明涉及一种SOL（短链核苷酸连接）技术和化学发光技术对血清miRNA（microRNA）标志物进行定量检测的方法。所述方法首先对血清样本进行预处理、固定捕获序列于酶标板上，然后杂交核酸探针a和b、血清中的目标miRNA，再通过多次清洗可去除错配和部分互补的miRNA，最后利用信号放大序列和化学发光技术对血清中目标miRNA含量进行检测。本发明提供的方法无需提取血清中的miRNA且无需扩增目标miRNA，灵敏度高，特异性强，可满足临床检测需求。

主权项

一种利用SOL技术和化学发光技术对血清miRNA标志物进行定量检测的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：S1：对临床采集的血清样本进行预处理使其中miRNA游离，得血清样品预处理溶液，备用；S2：向酶标板中加入捕获序列溶液，震荡，混合均匀后于25~40℃震荡，将捕获序列固定在酶标板上，弃去溶液，除去多余未反应的捕获序列；所述捕获序列为NH₂‑(CH₂)₁₂‑GTTGTAAATTGTAGTAAAGAAGTA；所述酶标板含有可与‑NH₂反应的基团；S3：将S1中的血清样品预处理溶液、核酸探针a溶液和核酸探针b溶液加入至S2的酶标板中，震荡，混合均匀后，于40~50℃静置条件下杂交15~21h，弃去滤液，清洗至少3次；所述核酸探针a为：CAAACAAACATTCAAATATCAATC‑与目标miRNA一半序列互补区域；所述核酸探针b为：与目标miRNA另一半序列互补区域‑TACTTCTTTACTACAATTTACAAC；S4：将信号放大序列溶液加入至S3得到的酶标板中，混合均匀后，于40~50℃静置条件下杂交不低于2h，将信号放大序列与核酸探针b杂交；所述信号放大序列为：GATTGATATTTGAATGTTTGTTG，所述信号放大序列上修饰一个或多个生物素；S5：向S4得到的酶标板中加入可与生物素反应的亲和素‑过氧化物酶融合蛋白溶液，震荡混合均匀后，通过生物素‑亲和素反应将亲和素‑过氧化物酶融合蛋白杂交在所述信号放大序列上；S6：向酶标板上加入可与过氧化物酶反应的化学发光底物进行化学发光检测，通过标准曲线即可得到miRNA的含量。