[发明专利]一种新的脓毒症动物模型的制备方法

摘要

本发明公开了一种新的脓毒症动物模型的制备方法，采用SPF级8周龄Balb/c小鼠，体重25‑30g，适应性饲养1周后，进行实验，其特征在于，包括如下步骤；步骤一适应性饲养及造模阶段，小鼠自由进食进水，采用12h间隔的光照/黑暗交替照明，温湿度适宜，将60只符合标准的Balb/c小鼠进行标记，雌雄各半，每只小鼠对应的序号固定且唯一。采用随机数字表法将其均分为雌性、雄性2个大组，每个大组又分为A（n＝6）、B（n＝8）、C（n＝8）、D（n＝8）4个小组；新模型预先用环孢素A等药物干预，造成了动物免疫功能低下的状态，这与因手术、年龄等其他原因导致免疫低下人群罹患脓毒症的情况相符，更好地模拟了脓毒症发生发展的自然过程。

主权项

一种新的脓毒症动物模型的制备方法，采用SPF级8周龄Balb/c小鼠，体重25‑30g，适应性饲养1周后，进行实验，其特征在于，包括如下步骤；步骤一：适应性饲养及造模阶段，小鼠自由进食进水，采用12h间隔的光照/黑暗交替照明，温湿度适宜，将60只符合标准的Balb/c小鼠进行标记，雌雄各半，每只小鼠对应的序号固定且唯一；采用随机数字表法将其均分为雌性、雄性2个大组，每个大组又分为A（n＝6）、B（n＝8）、C（n＝8）、D（n＝8）4个小组；步骤二：A组：对照组，在各个注射时间点，给予与药物和（或）细菌体积相同的生理盐水；步骤三：B组：环孢素A注射组：在第‑5天、‑3天、‑1天，称重各只小鼠，按5‑30mg/kg体重的剂量给予环孢素A腹腔注射，在第0天，给予与细菌体积相同的生理盐水腹腔注射；步骤四：C组：细菌注射组：在第‑5天、‑3天、‑1天，称重各只小鼠，给予生理盐水腹腔注射，在第0天，每只小鼠腹腔注射重悬于生理盐水的0.5‑5×109cfu细菌；步骤五：D组：环孢素A＋细菌组，在第‑5天、‑3天、‑1天，称重各只小鼠，按5‑30mg/kg体重的剂量给予环孢素A腹腔注射，在第0天，每只小鼠腹腔注射重悬于生理盐水的0.5‑5×109cfu细菌；步骤六：标本采集：各组动物，于第0天注射细菌或生理盐水，注射第12h开始，观察动物的生存状态，在小鼠毛发直立、腹部体温变低、触动没有反应时，摘除眼球取血并分离血清；脱颈处死小鼠，快速分离小鼠的肝、肾、肺、脾等组织，生理盐水漂洗两次，吸水纸吸去残留缓冲液后，将组织浸泡于4%多聚甲醛溶液中固定；步骤七：各组小鼠血清指标检测及病理分析：对小鼠血清，利用ELISA法检测血清炎症因子含量；利用生化分析仪检测小鼠肝、肾组织损伤指标；各组小鼠的肝、肾、肺等器官的石蜡切片经HE染色后，显微镜下比较组织损伤情况。