[发明专利]一种高纯度多杀菌素的提取方法

摘要

一种高纯度多杀菌素的提取方法，包括以下步骤1.硅藻土混均发酵液，NaOH调pH11.5；2.压滤收集菌体，85%溶剂溶解HCL调pH3.5；3.压滤，水稀释溶剂溶度60%，树脂吸附；4.75%溶剂将树脂吸附的多糖蛋白等杂质洗脱，用90%溶剂将树脂中吸附的多杀菌素解析，真空浓缩；5.NaOH调pH=11，使多杀菌素沉淀，过滤，用稀碱液洗涤多杀菌素1~3次，真空干燥，得90%以上粗品；6.用水溶解粗品磷酸调pH至5.0上柱洗脱，收98%多杀菌素，真空脱除溶剂，高碳醇萃取多杀菌素有机相；7.有机相加水反向萃取多杀菌素，反萃取相旋蒸，浓缩物置冻干机干燥得98%多杀菌素。本发明产品纯度高，满足特殊用途研究。

主权项

1.一种高纯度多杀菌素的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）发酵液预处理：发酵结束后放罐前，加入1%硅藻土混均，用3~5 mol/L的氢氧化钠溶液调节发酵液pH=11.5，然后将发酵液加热升温至45°C，保温并以450r/min速度搅拌处理12小时；（2）用板框压滤机进行压滤，进行固液分离，收集菌丝体，收集菌丝体用90%极性有机溶剂进行充分溶解并用HCL溶液调节pH值至3.5搅拌运行，浸泡抽提菌丝体中的多杀菌素；用板框压滤机进行压滤，再次进行固液分离，收集浸提清液；（3）用纯水稀释收集浸提清液至有机溶剂溶度至60%，通过大孔吸附树脂进行产物吸附，用65%‑75%%的极性有机溶剂将大孔树脂中吸附的多糖蛋白等杂质进行梯度洗脱，用90%的极性有机溶剂将大孔树脂中吸附的多杀菌素产物进行解析，45°C条件下真空浓缩，挥发除去极性溶剂，得到多杀菌素浓缩液；（4）用NaOH溶液调节pH值=11，搅拌1小时静置12小时使多杀菌素沉淀，过滤，用PH=10的稀碱液将多杀菌素沉淀洗涤1~3次，在45°C下真空干燥24小时，即得到90%以上多杀菌素粉剂粗品；（5)用多杀菌素粉剂粗品重量2倍1：1极性溶剂与纯水的混合剂溶解多杀菌素粉剂粗品并用3~5 mol/L的磷酸溶液调节pH值至5.0上层析柱进行等度洗脱，分部收集98%以上多杀菌素纯品，用旋转蒸发器在45°C真空下脱除洗脱剂中的极性溶剂，用低介电常数或高碳醇萃取溶媒进行萃取，得到负载多杀菌素有机相，萃取条件为：萃取溶媒与多杀菌素浓缩液体积比=1:1~5，温度20~45°C，pH=5.0~7.0，萃取时间5~10min；萃取完成分层后，收集负载有机相；（6）将负载有机相中加入纯水进行反向萃取，反萃取条件为：负载有机相与纯水体积比=1~5:1，纯水PH=6.0~6.5，温度20~30°C，反萃取时间5~8 min，反萃取级数为1~5；反萃取分层完成后收集反萃取相；将含有多杀菌素收集的反萃取相进行45°C真空旋蒸，脱除多余水分，形成油膏状。