[发明专利]一种高纯度多杀菌素的提取方法

说明书

一种高纯度多杀菌素的提取方法，包括以下步骤1.硅藻土混均发酵液，NaOH调pH11.5；2.压滤收集菌体，85%溶剂溶解HCL调pH3.5；3.压滤，水稀释溶剂溶度60%，树脂吸附；4.75%溶剂将树脂吸附的多糖蛋白等杂质洗脱，用90%溶剂将树脂中吸附的多杀菌素解析，真空浓缩；5.NaOH调pH=11，使多杀菌素沉淀，过滤，用稀碱液洗涤多杀菌素1~3次，真空干燥，得90%以上粗品；6.用水溶解粗品磷酸调pH至5.0上柱洗脱，收98%多杀菌素，真空脱除溶剂，高碳醇萃取多杀菌素有机相；7.有机相加水反向萃取多杀菌素，反萃取相旋蒸，浓缩物置冻干机干燥得98%多杀菌素。本发明产品纯度高，满足特殊用途研究。

技术领域

本发明涉及一种从发酵液中提取精制抗生素的方法，特别是涉及一种高纯度多杀菌素的提取方法。

背景技术

多杀菌素(spinosad，spinosyns)又名刺糖菌素、多杀霉素，是自土壤样品中分离的放线菌刺糖多孢菌(Saccharopolyspora spinosa)经有氧发酵产生的次级代谢产物，属大环内酯类抗生素，分子结构中含有一个二十二元内酯环、一个鼠李糖及一个福乐糖胺，在水中溶解度很小，易溶于醇类、酯类等多种极性、非极性有机溶剂。经有氧发酵后刺糖多孢菌发酵液中主要含有多杀菌素A(85~90%)、D(10~15%)两种杀虫活性成分，同时还会含有少量B、C、E、F、H、J、K、L等多种结构类似组分。多杀菌素对磷翅目(Lepidoptera)、双翅目(Diptera)、鞘翅目(Coleoptera)、缨翅目(Thysanoptera)、膜翅目(Hymenoptera)、等翅目(Isoptera)等多种农业害虫均有很强的毒杀作用，其选择毒性远高于其他常用的化学农药、生物农药，显著高于DDT、氯氰菊酯和阿维菌素，而对哺乳类、鱼类、两栖类等的毒性极低，具有毒力高、杀虫谱广、非靶标毒性低、对环境安全等优点，已广泛应用于棉花、茶叶、蔬菜等多种农作物及果树害虫防治。目前，含多杀菌素的农药产品由美国陶氏农业科学公司生产。我国有48%悬浮液(商品名：Tracer，催杀)和2.5%悬浮液(商品名：Success，菜喜)两种产品销售，分别应用于小菜蛾和棉铃虫等害虫的防治。

多杀菌素的杀虫作用机制新颖独特。研究表明，其主要是作用于烟碱型乙酰胆碱受体(nicotinic acetylcholine receptor, nAchR)和γ-氨基丁酸受体(gamma-aminobutyric acid receptor, GABAR)，导致虫体神经细胞超活化以及非功能性的肌肉收缩、衰竭，并伴随颤抖和麻痹，迄今没有发现与其他杀虫剂有交叉抗性。

作为一种高效绿色生物农药，多杀菌素的应用前景非常广阔。但是，关于多杀菌素制备工艺的研究，尚没有形成高效、高得率的工业生产技术，在多杀菌素提取制备、纯化方法等方面的研究也极少。美国专利U.S.P 5227295公开了一种从刺糖多孢菌发酵液中分离多杀菌素（文中称为A83543）的方法：向发酵液中加入等体积的丙酮并充分浸取，过滤后，滤液用NaOH溶液调pH至13，然后上HP-20ss吸附树脂，以甲醇:乙腈＝1:1(含0.1%乙酸钠)溶液0%~95%梯度洗脱多杀菌素A和D组分，利用HPLC进行跟踪检测，并分段收集洗脱液，将多杀菌素洗脱液浓缩后将其用石油醚稀释，稀释液上硅胶层析柱，用石油醚和甲醇梯度洗脱，利用HPLC跟踪检测，分段收集洗脱液，分别得到多杀菌素A和D的洗脱液。