[发明专利]一种从粗品中提取尿激酶的方法在审
| 申请号： | 201711272128.3 | 申请日： | 2017-12-06 |
| 公开（公告）号： | CN109880815A | 公开（公告）日： | 2019-06-14 |
| 发明（设计）人： | 刘乃山;夏衬来;冯骋武 | 申请（专利权）人： | 青岛康原药业有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/72 | 分类号： | C12N9/72 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 266300 山东省青岛*** | 国省代码： | 山东;37 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | 本发明公开了一种从粗品中提取尿激酶的方法。先用高浓度的盐溶液从粗品中提纯尿激酶，再用低浓度的盐溶液对尿激酶进一步纯化提取。在对尿激酶进行纯化提取过程中，通过不同浓度、不同成分的提取液，使尿激酶溶解于提取液中，然后在提取液中加入一定比例的乙醇使尿激酶沉淀析出。通过两种不同浓度抽提液的纯化、沉淀、脱水、干燥等步骤来实现从粗品中进一步提纯尿激酶。利用本方法提取的尿激酶效价高、杂质少、稳定性好，且本方法工艺较为简单、生产成本低、产量高、可进行工业化生产。 | ||
| 搜索关键词： | 尿激酶 粗品 提取液 盐溶液 提纯 沉淀 生产成本低 方法提取 析出 抽提液 效价 乙醇 脱水 溶解 | ||
【主权项】：
1.一种从粗品中提取尿激酶的方法，其特征在于，它包括以下步骤：（1）高盐提取液提取，（2）低盐提取液提取，（3）离心、脱水、干燥。
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于青岛康原药业有限公司，未经青岛康原药业有限公司许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/patent/201711272128.3/，转载请声明来源钻瓜专利网。
- 同类专利
- 一种从粗品中提取尿激酶的方法-201711272128.3
- 刘乃山;夏衬来;冯骋武 - 青岛康原药业有限公司
- 2017-12-06 - 2019-06-14 - C12N9/72
- 本发明公开了一种从粗品中提取尿激酶的方法。先用高浓度的盐溶液从粗品中提纯尿激酶，再用低浓度的盐溶液对尿激酶进一步纯化提取。在对尿激酶进行纯化提取过程中，通过不同浓度、不同成分的提取液，使尿激酶溶解于提取液中，然后在提取液中加入一定比例的乙醇使尿激酶沉淀析出。通过两种不同浓度抽提液的纯化、沉淀、脱水、干燥等步骤来实现从粗品中进一步提纯尿激酶。利用本方法提取的尿激酶效价高、杂质少、稳定性好，且本方法工艺较为简单、生产成本低、产量高、可进行工业化生产。
- 一种病毒灭活去除纯化尿激酶的方法-201711273020.6
- 刘乃山;夏衬来;刘君 - 青岛康原药业有限公司
- 2017-12-06 - 2019-06-14 - C12N9/72
- 本发明公开了一种病毒灭活去除纯化尿激酶的方法。具体的说，就是以健康成年男性新鲜尿液为原料，经过甲壳质吸附、氨水洗脱、硫酸铵盐析、吸附柱层析、亲和层析、低温乙醇沉淀及低PH法结合切向流超滤等现代蛋白质高端生化分离技术来制备高纯度的尿激酶，可以将总收率提高到70%以上，总效价不低于50000iu/mg，柱效提升约55%，病毒去除率不低于5log。
- 一种尿激酶精品的纯化方法-201711274440.6
- 刘乃山;夏衬来;王林鹏 - 青岛康原药业有限公司
- 2017-12-06 - 2019-06-14 - C12N9/72
- 本发明公开了利用滤芯过滤技术纯化尿激酶精品的技术方法。与传统方法相比，本方法的优点是：通过滤芯过滤方法，显著降低杂质含量；纯化的尿激酶精品收率高、比活高、热稳定性好，外观、理化、微生物限度等指标均达到或超过国内外相关药品标准；方法工艺简单，生产成本低，产量高，可工业化生产。
- 一种尿激酶的分离纯化方法-201710311962.2
- 李尔华;顾京;李争 - 江苏尤里卡生物科技有限公司
- 2017-05-05 - 2018-04-17 - C12N9/72
- 本申请属于尿激酶的纯化技术领域，具体涉及一种尿激酶的分离纯化方法。该方法包括如下步骤1)尿激酶粗品的制备；2)尿激酶的纯化；所述的步骤2)包括如下步骤将步骤1)制得的尿激酶粗品溶解后的澄清液经葡聚糖微球柱和/或琼脂糖微球柱进行纯化。本申请提供的分离纯化方法，可同时提高尿激酶比活性达至2万IU/mg蛋白以上，收率达75‑87％，大小分子尿激酶的比例大于85％；而且，由于尿激酶的分离纯化过程中避免使用强酸强碱，减少了环境污染。
- 固定化的纤溶酶原酶组合物、制备方法、用途和包含此类组合物的装置-201680034582.2
- G·勒布尔;C·索;F·瓦尔尼 - 阿卡多福塔公司
- 2016-04-14 - 2018-03-09 - C12N9/72
- 本发明涉及包含下列的酶组合物‑至少一种酶，称为纤溶酶原酶，其将包含纤溶酶原的血液血浆介质中的纤溶酶原转变为纤溶酶；‑在水性溶液中不可溶的固体载体，该固体载体具有适合于能保留在具有小于或等于0.22μm的截留阈值的滤器上的尺寸；其特征在于，所述纤溶酶原酶结合所述固体载体并且在与血液血浆介质相接触时保持与该载体结合，并且组合物处于干燥状态。本发明还涉及制备此类酶组合物的方法、其用途和用于制备无菌的和没有酶组合物的富含纤溶酶的离体血浆介质的装置(20)。
- 一种重组人尿激酶原的病毒去除方法-201510919362.5
- 李雪峰;赵国焓;韩进 - 上海天士力药业有限公司
- 2015-12-11 - 2017-06-20 - C12N9/72
- 本发明涉及一种重组人尿激酶原的病毒去除方法，所述方法包括，将重组人尿激酶原发酵液通过层析后获得的初步纯化液进行离子交换层析，使病毒牢固吸附在离子交换介质上，而重组人尿激酶原直接被洗脱下来。该方法对病毒的去除效果大于99.99％。
- 一种重组人尿激酶原的纯化及去除病毒方法-201510924093.1
- 赵侠;赵国焓;李雪峰;莫英;韩进 - 上海天士力药业有限公司
- 2015-12-11 - 2017-06-20 - C12N9/72
- 本发明提供了一种新的CHO细胞表达的重组人尿激酶原的蛋白纯化及去除病毒方法蛋白捕获、凝胶层析、阳离子交换层析、低pH孵育、亲和层析、阴离子交换层析、阳离子交换层析、纳米过滤，该方法得到蛋白纯度不低于98％，替换了Tris-HCl缓冲液的残留且通过去除/灭活病毒有效降低了临床使用风险。
- 一种制备尿激酶的方法-201710197822.7
- 王海瑶;靳海宁;熊祖应 - 深圳市伯劳特生物制品有限公司
- 2017-03-29 - 2017-05-17 - C12N9/72
- 本申请属于生物技术领域，具体涉及一种制备尿激酶的方法。该方法表达尿激酶的产量高、易纯化，表达的尿激酶蛋白糖基化和人体自身表达的尿激酶结构相似，功能相同。并且，该方法不受自然资源的限制，可根据市场需求不限量生产和人体相同结构的尿激酶，投入少、产出高，溶栓效果好，无毒副作用。
- 一种树脂再生提高柱效纯化尿激酶的方法-201611077795.1
- 刘乃山;张晓 - 青岛康原药业有限公司
- 2016-11-30 - 2017-03-22 - C12N9/72
- 本发明公开了一种树脂再生提高柱效纯化尿激酶的方法。具体的说，就是以健康成年男性新鲜尿液为原料，经过甲壳质吸附、氨水洗脱、硫酸铵盐析、吸附柱层析以及亲和层析等现代蛋白质高端生化分离技术来制备高纯度的尿激酶，可以将总收率提高到75%以上，总效价不低于50000iu/mg，柱效提升约55%。
- 一种提高尿激酶收率的方法-201611077802.8
- 刘乃山;张晓 - 青岛康原药业有限公司
- 2016-11-30 - 2017-03-22 - C12N9/72
- 本发明公开了一种提高尿激酶收率的方法。该方法利用尿激酶蛋白质在等电点溶解度最低的特性，通过调节尿液PH值，然后加入甲壳质吸附、过滤、洗脱、离心、沉淀、干燥步骤来实现从尿液中提取尿激酶。尿激酶的产品收率达到0.02%以上。
- 一种亲和层析纯化尿激酶的方法-201611197428.5
- 刘乃山;李先英;迟培升 - 青岛九龙生物医药集团有限公司
- 2016-12-22 - 2017-03-22 - C12N9/72
- 本发明公开了一种亲和层析纯化尿激酶的方法。具体的说，就是以健康成年男性新鲜尿液为原料，经过甲壳质吸附、吸附柱层析以及亲和层析等现代蛋白质高端生化分离技术来制备高纯度的尿激酶，可以将总收率提高到80%以上，总效价不低于40000iu/mg。
- 从尿液中提取尿激酶和乌司他丁的方法-201510691424.1
- 张昭 - 张昭
- 2015-10-23 - 2016-01-13 - C12N9/72
- 本发明提供了一种从尿液中提取尿激酶和乌司他丁的方法，包括：收集尿液并调节其PH值；在尿液中加入粉末状硅胶并搅拌使尿液中的尿激酶蛋白被硅胶吸附；通过过滤方式获取硅胶并调节过滤后的尿液PH值；在过滤后的尿液中加入甲壳素使尿液中的乌司他丁蛋白被甲壳素吸附；从硅胶和甲壳素上分别获取尿激酶蛋白液和乌司他丁蛋白液；将尿激酶蛋白液加入到饱和水中提取得到尿激酶，在乌司他丁蛋白液中加入硫酸铵提取得到乌司他丁。本发明可在尿液中提取尿激酶粗品和乌司他丁粗品，大大提高了尿液的经济价值。
- 一种尿激酶分离纯化方法-201510782493.3
- 李尔华;顾京;陈爱秀 - 江苏尤里卡生物科技有限公司
- 2015-11-16 - 2016-01-13 - C12N9/72
- 本发明涉及一种尿激酶分离纯化方法，其特征在于，其包含如下步骤，1）尿激酶的分离2）尿激酶的分离纯化所述的步骤1）具体包括以下步骤：a）男性尿液，在10℃以下，调节pH8.5，静置2小时，弃去沉淀，得上清液；b）取上清液，调pH5.0-5.5酸化，得酸化尿，通过硅藻土柱进行吸附；c）5℃冷水洗柱，以1%氨水和氯化钠进行洗脱，得洗脱液；d）洗脱液用饱和硫酸铵和4%氨水盐析，得尿激酶粗品；e）向沉淀中加入一定量的氨水，使沉淀中的尿激酶充分解离，得尿激酶溶液。
- 聚乙二醇修饰的低分子量尿激酶及其制备方法和应用-201510499115.4
- 苗丕渠;韩大雄;厉道娟;耿春晨;王筱蒙;池正昌;沈小宁 - 扬州艾迪生物科技有限公司
- 2015-08-14 - 2015-11-25 - C12N9/72
- 本发明提供一种聚乙二醇修饰的低分子量尿激酶及其制备方法和应用。本发明采用聚乙二醇（PEG）修饰低分子量尿激酶（LMW-UK），聚乙二醇与LMW-UK的N-末端通过共价键方式连接，获得LMW-UK的聚乙二醇修饰产物。修饰产物均一性好、分离纯化工艺简单、活性回收率高，同时，显著延长了体内半衰期，具有有效治疗高纤维蛋白原血症和预防动脉粥样硬化（AS）、血栓栓塞并发症、糖尿病血管并发症、糖尿病肾病等功效。
- 一种制备尿激酶的方法-201510549397.4
- 郑少亮;王旭;肖益热;田友军 - 广东天普生化医药股份有限公司
- 2015-09-01 - 2015-11-25 - C12N9/72
- 本发明涉及一种直接在小便池或便斗中用装改性硅胶的滤布袋吸附尿液中的尿蛋白，并将吸附尿蛋白的滤布袋运至加工点进行后续处理的尿蛋白富集方法。本方法利用特定尿蛋白的等电点性质，通过使用包括改性硅胶,大孔树脂，甲壳素，离子树脂等；对尿胰蛋白酶抑制剂、人尿激肽原酶、尿激酶等尿蛋白直接有效吸附，避免了尿液的收集步骤。该方法对厕所的卫生状况无明显影响，并大幅度降低了尿液运输的成本以及带来的一系列环境问题。
- 一种纯化尿激酶的方法-201410222057.6
- 郭国岭;扈会平;徐晓;曹延琴;王伟梅;邱伟 - 丽珠集团丽珠制药厂
- 2014-05-21 - 2014-09-10 - C12N9/72
- 一种纯化尿激酶的方法。本发明将尿激酶粗品中2个主要分子量区域的蛋白分开处理，通过调节pH值等手段进一步去除粗品中的杂质、热源和细胞内毒素，得到了尿激酶精品。
- 一种能够去除热原及病毒的尿激酶的制备方法-201410087719.3
- 吕金花;刘翠珍;葛翠凤;朱琳 - 青岛九龙生物医药有限公司
- 2012-12-28 - 2014-06-18 - C12N9/72
- 本发明公开了一种能够去除热原及病毒的尿激酶的制备方法。本发明的技术方法是将尿激酶粗品经DEAE-纤维素层析、CMC层析、亲和层析、去热原后得到尿激酶精品。该技术的优点在于在生产过程中采用60℃水浴灭菌处理使病毒失活以及用磷酸三钠和醋酸钙吸附去除产品中的热原，保证产品的质量。该方法得到的尿激酶无病毒无热原，且精品的比活能够达到13万单位/mg以上。
- 一种重组大肠杆菌发酵液中分离纯化重组人尿激酶原的制备工艺-201410060713.7
- 苏显英;赵洪礼;王艳;林海;陈铮 - 东北制药集团股份有限公司
- 2014-02-24 - 2014-05-14 - C12N9/72
- 一种应用于生物制药技术领域中的重组大肠杆菌发酵液中分离纯化重组人尿激酶原的制备工艺，所述制备工艺包括如下步骤，以人工合成的人尿激酶原全基因序列为模板，通过PCR获取人尿激酶原的目的基因片段，构建含人尿激酶原的原核表达载体，将此表达载体转化大肠杆菌，筛选并挑取阳性克隆株，即为人尿激酶原的基因工程菌株；将人尿激酶原的工程菌株接种到固体LB培养基中，挑取单菌落接种到液体LB培养基中，32℃摇床培养过夜，然后按比例接种到发酵培养基中，32℃摇床培养过夜，再按比例接种到发酵罐内，升温至42℃诱导培养4小时，离心收集菌体，超声破碎菌体，离心收集沉淀，即为人尿激酶原的包涵体。该发明不受自然资源的限制，具有投入少，产出高，利润空间大，溶栓作用机理独特，效果明显，无或低毒副作用。
- 一种制备尿激酶粗品的方法-201310643507.4
- 刘乃山;张晓涵;安迪;张元泽 - 青岛康原药业有限公司
- 2013-11-30 - 2014-04-23 - C12N9/72
- 本发明公开了一种制备尿激酶粗品的方法。本发明的技术方案是利用吸附工序、脱附工序、盐析工序从合格尿液中制备尿激酶粗品的方法。本发明操作简单且有较高的收率。
- 一种尿激酶与人尿胰蛋白酶抑制剂的分离方法-201310020363.7
- 苗丕渠;苏古方;许冬至;沈小宁 - 扬州艾迪生物科技有限公司
- 2013-01-18 - 2013-05-01 - C12N9/72
- 本发明公开了一种尿激酶与人尿胰蛋白酶抑制剂的分离方法。该方法包括如下步骤：将含有尿激酶和人尿胰蛋白酶抑制剂的溶液，调节pH；缓慢加入硫酸铵粉末，一边加硫酸铵粉末，一边搅拌直到溶液中出现明显蛋白沉淀；调节pH至9.0±0.6；静置后，离心或者加硅藻土过滤，收集富含尿激酶的沉淀，获得尿激酶；上清继续加入硫酸铵至，一边加硫酸铵粉末，一边搅拌使其溶解；静置后，离心或者加硅藻土过滤，收集富含人尿胰蛋白酶抑制剂沉淀2，获得人尿胰蛋白酶抑制剂。该方法简便可行，周期短，有效保护UK和UTI活性，减少UK降解，提高UK质量，不需要特殊设备，降低设备的投入成本。
- 一种能够去除热原及病毒的尿激酶的制备方法-201210598016.8
- 吕金花;刘翠珍;葛翠凤;朱琳 - 青岛九龙生物医药有限公司
- 2012-12-28 - 2013-04-24 - C12N9/72
- 本发明公开了一种能够去除热原及病毒的尿激酶的制备方法。本发明的技术方法是将尿激酶粗品经DE AE-纤维素层析、CMC层析、亲和层析、去热原后得到尿激酶精品。该技术的优点在于在生产过程中采用60℃水浴灭菌处理使病毒失活以及用磷酸三钠和醋酸钙吸附去除产品中的热原，保证产品的质量。该方法得到的尿激酶无病毒无热原，且精品的比活能够达到13万单位/mg以上。
- 一种纯化CHO细胞表达尿激酶原的方法-201010164373.4
- 李世崇;张正光;胡显文;胥照平;陈昭烈;刘红;高丽华;肖成祖 - 中国人民解放军军事医学科学院生物工程研究所
- 2010-05-06 - 2010-11-10 - C12N9/72
- 本发明公开了一种从CHO细胞表达尿激酶原的细胞培养液中纯化尿激酶原的方法。该方法包括阳离子交换层析、疏水层析和凝胶过滤的有机组合，能够有效的去除尿激酶原产品中的杂蛋白，得到纯度超过95％以上的尿激酶原产品。该方法能够有效的提高产品生产效率和质量。
- 一种制备尿激酶的方法-200910186618.0
- 张志武;刘兰花;曾英;朱月华;杨益辉 - 南昌市万华生化药业有限公司
- 2009-12-07 - 2010-05-05 - C12N9/72
- 一种制备尿激酶的方法，其特征在于采用了D160阳离子树脂交换法、亲和膜色谱法及亲和层析法相结合，以尿激酶粗品为原料制备尿激酶。所得到的尿激酶质量优于现有国内水平，尿激酶比活可达到150,000IU/mg.pr以上，高分子尿激酶相对含量可达到96％以上，尿激酶生物活性回收率可达到65％。本方法解决了现有尿激酶制备方法普遍存在的操作繁琐、产品质量差，收率低和生产成本高等问题。
- 专利分类
