[发明专利]一种代谢物-蛋白质相互作用体系筛选和表征方法在审
| 申请号： | 201711263776.2 | 申请日： | 2017-12-05 |
| 公开（公告）号： | CN109870516A | 公开（公告）日： | 2019-06-11 |
| 发明（设计）人： | 许国旺;王博弘;秦倩;石先哲;常蒙蒙 | 申请（专利权）人： | 中国科学院大连化学物理研究所 |
| 主分类号： | G01N30/02 | 分类号： | G01N30/02;G01N30/72;G01N30/34;G01N33/68 |
| 代理公司： | 沈阳科苑专利商标代理有限公司 21002 | 代理人： | 马驰 |
| 地址： | 116023 *** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种基于代谢组学及结构质谱技术的代谢物‑蛋白质相互作用体系筛选和表征方法，通过亲和固载方法将异源表达的带有标签的靶标蛋白进行固定，再将其与代谢物提取物共同孵育，最后将靶标蛋白‑代谢物复合物分离及变性洗脱后进行非靶向代谢组学分析，对比其与对照组(没有固定蛋白的亲和载体)差异，从而筛选出与靶标蛋白具有潜在相互作用的代谢物。继而利用结构质谱对潜在相互作用体系进行直接验证。该结合方法即能够高通量筛选与靶标蛋白具有潜在相互作用代谢物，利用结构质谱的直接表征又能筛除间接表征过程中可能引入的假阳性互作结果。该方法是一种可靠的蛋白质‑代谢物相互作用高通量研究手段。 | ||
| 搜索关键词： | 代谢物 靶标蛋白 蛋白质相互作用 体系筛选 质谱 代谢组学分析 高通量筛选 代谢组学 固定蛋白 间接表征 亲和载体 异源表达 质谱技术 非靶向 复合物 高通量 假阳性 提取物 变性 孵育 固载 洗脱 蛋白质 标签 筛选 验证 引入 研究 | ||
【主权项】：
1.一种基于代谢组学及结构质谱技术的代谢物‑蛋白质相互作用体系筛选和表征方法，其特征在于：第一步：通过亲和固载方法将异源表达的带有标签的靶标蛋白进行固定；第二步：固定靶标蛋白与生物组织中小分子代谢物提取物共同孵育为实验组；以相同用量的没有固定蛋白的相同亲和载体与生物组织中小分子代谢物提取物共同孵育为对照组；第三步：于实验组和对照组中分别加入咪唑将固定的靶标蛋白‑代谢物复合物进行洗脱后加入甲醇沉淀蛋白，离心取其上清冻干后，利用非靶向代谢组学分析方法筛选出与靶标蛋白具有潜在相互作用的代谢物；第四步：将与靶标蛋白具有潜在相互作用的代谢物与靶标蛋白共同孵育并直接进样进行结构质谱分析，通过观测是否存在靶标蛋白‑代谢物复合物质谱峰确定两者之间是否具有相互作用。
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