[发明专利]靶向并引导Cas9蛋白高效切割TCR及B2M基因座的sgRNA

摘要

本发明提供靶向并引导Cas9蛋白高效切割TCR及B2M基因座的sgRNA。具体地，本发明提供一种用于制备通用型CAR‑T细胞的试剂，靶向TCR和/或B2M的sgRNA或用于表达所述sgRNA的表达载体。本发明的sgRNA能够高效、特异、稳定、不易脱靶、不相互干扰地敲除TCR和B2M基因，从而大幅度提高了基因敲除效率。此外，本发明还提供了用所述sgRNA改造的通用型CAR‑T细胞。本发明能有效降低移植物抗宿主病以及免疫排斥风险。

主权项

1.一种用于制备通用型CAR‑T细胞的试剂，其特征在于，所述试剂包括：(i)靶向TCR和/或B2M的sgRNA或用于表达所述sgRNA的表达载体，所述sgRNA为选自下组的一种或多种核苷酸序列：(A)靶向TCR的α链的sgRNA：TRAC‑sgRNA0、TRAC‑sgRNA5、TRAC‑sgRNA6、TRAC‑sgRNA7、TRAC‑sgRNA8、TRAC‑sgRNA9、TRAC‑sgRNA10、TRAC‑sgRNA11、TRAC‑sgRNA12、TRAC‑sgRNA13、TRAC‑sgRNA14、TRAC‑sgRNA15、TRAC‑sgRNA16、TRAC‑sgRNA17、TRAC‑sgRNA18、TRAC‑sgRNA19、TRAC‑sgRNA20；较佳地，TRAC‑sgRNA5、TRAC‑sgRNA6、TRAC‑sgRNA7、TRAC‑sgRNA8、TRAC‑sgRNA9、TRAC‑sgRNA10、TRAC‑sgRNA12、TRAC‑sgRNA13、TRAC‑sgRNA14、TRAC‑sgRNA15、TRAC‑sgRNA16、TRAC‑sgRNA17、TRAC‑sgRNA20；(B1)靶向TCR的β1链的sgRNA：TRBC1‑sgRNA1、TRBC1‑sgRNA2、TRBC1‑sgRNA3、TRBC1‑sgRNA4、TRBC1‑sgRNA5、TRBC1‑sgRNA6、TRBC1‑sgRNA7、TRBC1‑sgRNA8、TRBC1‑sgRNA9、TRBC1‑sgRNA10、TRBC1‑sgRNA11、TRBC1‑sgRNA12、TRBC1‑sgRNA13、TRBC1‑sgRNA14、TRBC1‑sgRNA15；较佳地，TRBC1‑sgRNA3、TRBC1‑sgRNA4、TRBC1‑sgRNA5、TRBC1‑sgRNA6、TRBC1‑sgRNA7、TRBC1‑sgRNA8、TRBC1‑sgRNA9、TRBC1‑sgRNA11、TRBC1‑sgRNA12、TRBC1‑sgRNA13、TRBC1‑sgRNA14、TRBC1‑sgRNA15；(B2)靶向TCR的β2链的sgRNA：TRBC2‑sgRNA1、TRBC2‑sgRNA2、TRBC2‑sgRNA3、TRBC2‑sgRNA4、TRBC2‑sgRNA5、TRBC2‑sgRNA6、TRBC2‑sgRNA7、TRBC2‑sgRNA8、TRBC2‑sgRNA9、TRBC2‑sgRNA10、TRBC2‑sgRNA11、TRBC2‑sgRNA12、TRBC2‑sgRNA13、TRBC2‑sgRNA14、TRBC2‑sgRNA15；较佳地，TRBC2‑sgRNA1、TRBC2‑sgRNA3、TRBC2‑sgRNA4、TRBC2‑sgRNA5、TRBC2‑sgRNA6、TRBC2‑sgRNA8、TRBC2‑sgRNA9、TRBC2‑sgRNA10、TRBC2‑sgRNA12、TRBC2‑sgRNA13；(C)靶向B2M的sgRNA：B2M‑sgRNA1、B2M‑sgRNA2、B2M‑sgRNA3、B2M‑sgRNA4、B2M‑sgRNA5、B2M‑sgRNA6、B2M‑sgRNA7、B2M‑sgRNA8、B2M‑sgRNA9、B2M‑sgRNA10、B2M‑sgRNA11、B2M‑sgRNA12、B2M‑sgRNA13、B2M‑sgRNA14、B2M‑sgRNA15、B2M‑sgRNA16、B2M‑sgRNA17、B2M‑sgRNA18、B2M‑sgRNA19、B2M‑sgRNA20；较佳地，B2M‑sgRNA1、B2M‑sgRNA2、B2M‑sgRNA3、B2M‑sgRNA4、B2M‑sgRNA5、B2M‑sgRNA6、B2M‑sgRNA7、B2M‑sgRNA13、B2M‑sgRNA17、B2M‑sgRNA20；以及任选的(ii)表达Cas9蛋白或表达Cas9蛋白的表达盒。